結(jié)核分枝桿菌RD1蛋白PE35經(jīng)TLR2干擾IL-1β信號傳遞.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核病的致病菌，是歷史上最成功的致病菌之一，全球約1/3的人口感染過結(jié)核菌，每年約150萬人死于結(jié)核菌感染。耐藥結(jié)核分枝桿菌的出現(xiàn)和與HIV的共感染更加劇了結(jié)核病控制形勢。
　　PE家族作為結(jié)核菌基因組中一個獨特的家族。PE家族基因有兩個亞家族:PE_和PE_PGRS。目前為止，有許多PE_PGRS亞家族的功能的研究，包括改變細(xì)胞結(jié)構(gòu)和菌落形態(tài)，作為酯酶為遲留的分枝桿菌提供能量，與抗原變異有關(guān)，維持結(jié)核分枝桿菌在肉芽

2、腫中的遲留狀態(tài)。然而，PE家族的蛋白在結(jié)核分枝桿菌致病性中的功能仍然是未知的。PE35，一個PE家族成員，同時屬于RD1，在致病的分枝桿菌種是較保守的，在減毒株BCG中是不存在的，推測其可能與結(jié)核分枝桿菌的毒力相關(guān)。
　　位于天然免疫細(xì)胞上的不同的模式識別受體(PPRs)識別分枝桿菌組分，引起細(xì)胞因子的誘導(dǎo)，從而有利于感染的早期控制。許多細(xì)胞因子與結(jié)核分枝桿菌的控制有關(guān)，如IL-12p70，IL-23，IL-27，IL-35，IL

3、-1α，IL-1β，IL-18，IL-33，TNF-α，IFN-γ，TypeⅠ IFNs，IL-17，Th17-相關(guān)細(xì)胞因子，IL-10和其他的免疫抑制細(xì)胞因子。我們研究PE35在巨噬細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生中的作用及其涉及的信號通路。以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組為模板，擴增PE35基因，把PCR膠回收產(chǎn)物與pMD19-T載體相連，再亞克隆進(jìn)pEGFP-C1質(zhì)粒上。重組的pEGFP-C1-PE35質(zhì)粒被轉(zhuǎn)染進(jìn)RAW264.7細(xì)胞中。用L

4、PS預(yù)處理RAW264.7細(xì)胞，通過實時定量熒光PCR和ELISA檢測了細(xì)胞因子的表達(dá)。此外，我們也通過免疫印跡實驗鑒別了引起細(xì)胞因子減弱表達(dá)的信號通路。最后，我們也進(jìn)行了驗證PE35與TLR2相互作用的pull down實驗。
　　PE35在巨噬細(xì)胞中減弱了LPS誘導(dǎo)的促炎的細(xì)胞因子IL-1β的產(chǎn)生，這種效應(yīng)不依賴于p38 MAPK和Erk1/2途徑。而且，pull down實驗發(fā)現(xiàn)了PE35與TLR2的相互作用。IL-1β在細(xì)