雞傳染性支氣管炎病毒河南地方株分離鑒定及HN104株與HN091株全基因組序列測定.pdf

1、雞傳染性支氣管炎是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病。主要引起雞支氣管、氣管、腎臟、輸卵管、腺胃、腸道等病變,在飼養(yǎng)環(huán)境差的情況下,易引起大腸桿菌、支原體等繼發(fā)感染而提高雞群的發(fā)病死亡率,導(dǎo)致產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能降低。單一疫苗免疫很容易失敗,給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大損失。為此,掌握河南省養(yǎng)雞業(yè)中IBV流行變異株的分子特征有利于IB的檢測防控工作。
　　

2、 本試驗鑒定了2008～2010年自河南開封、新密、許昌、新鄭、滎陽等市縣分離的7株IBV毒株,代號分別為HN081、HN082、HN091、HN092、HN101、HN102和HN104。將分離株進行9～10日齡SPF雞胚尿囊腔接種后收集尿囊液進行常規(guī)細菌、血凝試驗檢測陰性后、用RT-PCR方法擴增IBV SI與N基因。對分離株HN104尿囊液用新配制1％胰酶處理尿囊液后血凝滴度為28,EID50為10-5.5/0.1ml,對NDV

3、在雞胚增值產(chǎn)生干擾作用,動物回歸試驗顯示:HN104株可致SPF雛雞出現(xiàn)呼吸道和“花斑腎”癥狀。
　　 通過對4株河南分離株進行S1基因的序列測定,核苷酸同源性在77.4～96.9％,與39株參考IBV同源性為76～100％,并且構(gòu)建進化樹,分離株HN104與HN082為基因Ⅰ型屬于近10多年優(yōu)勢流行致腎病變LX4基因型；HN091為基因Ⅲ型屬于臺灣獨特TW2296/95型基因型毒株；HN092為基因Ⅱ型與疫苗株型M41核苷酸同

4、源性高為99％,可能是免疫壓力下變異的疫苗株。除HN092外的其它3株分離毒與美國Mass型疫苗株、澳大利亞T株、歐洲4/91株親緣關(guān)系遠低于78％。對N基因進化樹分析6株分離株中5株屬LX4基因型。
　　 通過對2009年分離的HN091株和2010年分離的HN104株進行全基因組序列測定和分析,其基因組全長序列和各個基因均表現(xiàn)出與國內(nèi)分離株較高的相似性。HN091與HN104分離株與已報道的12株全基因代表性毒株的各基因同源

5、性比較分析,發(fā)現(xiàn)全基因組中最保守的是非結(jié)構(gòu)基因5b,變異最大是非結(jié)構(gòu)基因3b;5’UTR與病毒起始復(fù)制起重要作用非常保守同源性92.0～09.8％。3’UTR變異大同源性59.1～99.5％,3’UTR缺失的大片段可能有利于病毒復(fù)制與發(fā)轉(zhuǎn)錄。
　　 HN091分離株是一自然重組株,其S1基因重組于臺灣獨特基因型TW2575/98型毒株,3a、3b基因重組與廣西GX-YL5型毒株,HN091全基因主體于另一河南分離株HN104型毒

6、株同源性高,推斷是不同毒株基因重組或點突變的結(jié)果。HN104株全基因與2007年四川德陽分離株DY07同源性高達95％；通過對HN104的每個基因與5’UTR與3’UTR進行BLAST檢索及系統(tǒng)進化樹分析表明HN104株是DY07遺傳演化的結(jié)果。
　　 河南是養(yǎng)禽業(yè)大省,地處中原交通便利,也為IB的傳播流行提供了前提條件。研究表明,河南省雞群中IBV存在多種基因型變異病毒,本次試驗分離出大多是中國最流行LX4基因型毒株。河南分離