H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、目的:探討H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstem cells，MSCs)分化為心肌樣細(xì)胞的誘導(dǎo)作用。
　　方法:運用全骨髓貼壁篩選法分離培養(yǎng)大鼠MSCs，制備H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液作為誘導(dǎo)培養(yǎng)液，將MSCs誘導(dǎo)培養(yǎng)1、3、5、7天。以表達(dá)心肌特異性標(biāo)志物的H9C2細(xì)胞為陽性對照組，以H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)得MSCs為分化實驗組，以未處理的MSCs為陰性對照組;對各組細(xì)胞及MSCs增殖分化細(xì)胞進(jìn)行心肌細(xì)胞特

2、性檢測，即用免疫熒光法和western-blot檢測其肌鈣蛋白T(cTnT)、心肌細(xì)胞結(jié)蛋白(desmin)的表達(dá)，用實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測其心肌細(xì)胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重鏈(a-MHC)和β-心肌肌球蛋白重鏈(β-MHC)mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1 H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)MSCs培養(yǎng)7天，免疫熒光技術(shù)檢測各組細(xì)胞中肌鈣蛋白T的表達(dá)，MSCs增殖分化細(xì)胞中cTnT陽性細(xì)胞達(dá)0.179±0.01

3、1，顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　2 H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)MSCs培養(yǎng)7天，western-blot檢測各組細(xì)胞中肌鈣蛋白T、desmin的表達(dá)，westem-blot檢測誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs后分化細(xì)胞cTnT蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，desmin表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)。
　　3 H9C2細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)MSCs培養(yǎng)7天，RT-PCR檢測各組細(xì)胞中a-MHC與β-MHC mRNA表達(dá)，RT-PCR檢測分化細(xì)