Corin在動脈粥樣硬化中的表達及其作用的初步探討.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病、心梗、中風等眾多心腦血管疾病的主要病理基礎，控制動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展是防治這些心腦血管疾病的根本性戰(zhàn)略性措施。盡管目前關于動脈粥樣硬化的發(fā)病機制有多種學說，且許多基因都與其病理過程有關，但作為一個多危險因素綜合作用導致的疾病，其確切原因仍不十分清楚。因此進一步探尋動脈粥樣硬化相關基因及其在疾病中的作用，將有助于我們采取更加全面綜合和有效的方案來預防、治療與控制疾病。
　

2、　Corin是一種新發(fā)現(xiàn)的Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶，主要在心臟表達，通過活化心房利鈉肽（心鈉肽，atrial natriuretic peptide，ANP），調節(jié)血壓和心臟功能。Corin基因變異和功能障礙能導致其活性降低，可能與一系列心血管疾病如高血壓、心肌肥厚及心力衰竭等的發(fā)病相關。新近的研究表明，心肌細胞膜表面已處于活化狀態(tài)的corin可通過ADAM10酶切介導其脫落進入血液循環(huán)中，且脫落釋放的可溶性corin片段是保留其活性的，所

3、以心臟表達的corin可能通過這種方式到達其它組織器官局部發(fā)揮作用。流行病學研究表明，人血漿中可溶性corin濃度與肥胖、中風、心肌梗死疾病相關，提示corin可能參與了這些疾病的病理過程。但corin與動脈粥樣硬化的關系，還未見報道。
　　在本研究中，我們通過體內體外實驗，首次對corin在主動脈中的表達及其與動脈粥樣硬化的相關性進行探討，并對其作用及機制進行了初步研究。
　　通過此研究，我們希望明確corin基因與動脈粥

4、樣硬化病理過程之間的關系，進一步擴展我們對corin生物活性及作用特點的認識，以及我們對動脈粥樣硬化發(fā)病機制的認識，進一步為動脈粥樣硬化相關疾病的防治提供新的藥物作用靶點和思路。
　　目的:
　　1.檢測corin是否在主動脈中表達，并確定其細胞表達定位。
　　2.明確corin與動脈粥樣硬化損傷的相關性。
　　3.分別對主動脈內皮細胞表達的corin和循環(huán)中由心肌細胞脫落而來的可溶性corin在動脈粥樣硬化中的

5、作用及機制進行初步探討。
　　方法:
　　1.本研究采用RT-PCR、免疫組化和免疫熒光染色技術，首先確定corin是否在主動脈中表達及其細胞定位。
　　2.體內動物模型建立與分組:體內實驗通過給予ApoE-/-小鼠高脂飲食建立體內動脈粥樣硬化模型，設為動脈粥樣硬化(AS)組，正常飲食C57BL/6小鼠為對照組(WT)。然后采用RT-qPCR、Western blotting、免疫組化等技術檢測小鼠主動脈組織和心肌組織

6、中corin及其底物ANP在動脈粥樣硬化動物模型中的表達變化，從而明確corin與動脈粥樣硬化的相關性。
　　3.體外模型建立與分組:體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)株，首先通過RT-PCR和免疫組化、免疫熒光確認corin在HUVECs中是否有表達，為以HUVECs作為體外模型奠定基礎。然后通過不同劑量ox-LDL刺激HUVECs，建立體外動脈粥樣硬化內皮細胞損傷模型，采用RT-qPCR和細胞免疫熒光技術，檢測細胞中co

7、rin的表達水平變化。有助于進一步明確corin與動脈粥樣硬化的相關性。
　　4.siRNA轉染及細胞劃痕實驗:體外通過小干擾RNA分別沉默內皮細胞和心肌細胞表達的corin，從而體外分別模擬主動脈內皮細胞表達的corin缺失、以及由心臟脫落而來的可溶性corin的缺失，然后通過內皮細胞劃痕實驗，分別觀察這兩部分corin的缺失對內皮細胞遷移功能的影響。從而對這兩部分corin在動脈粥樣硬化中的作用及機制進行初步探討。
　　

8、結果:
　　1.Corin在主動脈局部有表達，且主要表達于內皮細胞。
　　2.通過體內動物實驗發(fā)現(xiàn)，在動脈粥樣硬化模型組中，主動脈局部表達的corin-ANP升高，提示主動脈局部的corin可能通過活化ANP，參與動脈粥樣硬化過程。而心臟中corin-ANP的表達與正常對照組相比，沒有顯著差異，但心臟表達的corin有多少能夠脫落進入循環(huán)到達主動脈局部發(fā)揮作用，我們尚未可知，因此對于心肌細胞合成后脫落生成的可溶性corin在

9、動脈粥樣硬化中的作用，我們又設計了進一步的體外實驗來進行驗證。
　　3.體外細胞實驗中，首先證實了corin在培養(yǎng)的內皮細胞中的表達，ox-LDL刺激內皮細胞后，內皮細胞中corin表達升高，并呈現(xiàn)明顯劑量依賴性。4.小干擾RNA沉默使內皮細胞表達的corin缺失后，能夠抑制內皮細胞的遷移;而使心臟脫落而來的可溶性corin缺失后，也能夠抑制內皮細胞的遷移。提示主動脈局部內皮細胞表達的corin以及循環(huán)中由心肌細胞合成后脫落生成的