富硒大蒜抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的初步探討.pdf

1、目前，心血管疾病已經(jīng)成為導(dǎo)致世界人口死亡的主要原因，動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是其主要的病理基礎(chǔ)。在AS復(fù)雜的形成機(jī)制中，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷是最為重要的起始環(huán)節(jié)。大量實(shí)驗(yàn)研究顯示，大蒜和硒均具有抗氧化、抗凝血、降血脂等作用，能夠抑制多種AS形成的危險(xiǎn)因素，從而降低心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　 上世紀(jì)90年代開(kāi)始，人們就考慮將大蒜與硒結(jié)合使用，以增強(qiáng)其抗AS的作用。本課題組早在1996年就已發(fā)現(xiàn)大蒜制品與

2、無(wú)機(jī)硒聯(lián)合使用能夠降低高脂飲食造成的家兔血脂水平，并能降低人類的胃癌死亡率。但研究中也發(fā)現(xiàn)，簡(jiǎn)單地將大蒜制品與無(wú)機(jī)硒混合使用，會(huì)因其pH值不同而彼此間發(fā)生中和反應(yīng)，降低各自的生物活性。另外，無(wú)機(jī)硒具有蓄積毒性因而不宜長(zhǎng)期使用，而有機(jī)硒雖然毒性低但制備困難且價(jià)格昂貴，也難以長(zhǎng)期使用。這些問(wèn)題都使得如何能將硒與大蒜有效地結(jié)合，且既能避免硒的毒性作用，又簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)成為了一大難題。此時(shí)，富硒大蒜的培育成功為解決這一問(wèn)題提供了新的思路。
　

3、　 大蒜本身具有硒富集作用，若在種植時(shí)施加高濃度的硒肥，就可以從外界吸收無(wú)機(jī)硒，并通過(guò)天然的生物轉(zhuǎn)化作用將其轉(zhuǎn)化為有機(jī)形式。富硒大蒜不僅兼具硒和大蒜二者的生物活性成分，而且它所含有的硒成分毒性和蓄積性也大大降低。因此，若能證實(shí)富硒大蒜具有抗AS作用，則既能為防治心血管疾病提供新的方法，同時(shí)也能為富硒大蒜種植打開(kāi)更為廣闊的市場(chǎng)。
　　 目前，有關(guān)富硒大蒜抗AS作用的研究尚不多見(jiàn)。故此，本研究首先將對(duì)富硒大蒜的主要組成部分——大蒜

4、和硒的抗AS作用進(jìn)行探討。由于AS是一種病理改變過(guò)程，臨床上不易檢出和確定。而冠心病作為AS最常導(dǎo)致的心血管疾病之一，在習(xí)慣上常被等同于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病。故此，本研究采用冠心病代替AS作為研究對(duì)象，利用Meta分析方法對(duì)硒和大蒜防治冠心病的作用進(jìn)行定量綜合，以期評(píng)價(jià)二者對(duì)AS形成與發(fā)展的作用，進(jìn)而從一定程度上為探討富硒大蒜抗AS的作用提供理論基礎(chǔ)。
　　 現(xiàn)有的針對(duì)富硒大蒜的實(shí)驗(yàn)室研究主要集中于其抗癌和抗氧化作用方面，有

5、關(guān)其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究較少。而ox-LDL造成的內(nèi)皮細(xì)胞損傷正是AS的重要起始環(huán)節(jié)。若能證實(shí)富硒大蒜具有抑制ox-LDL造成的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用，或許就可以從形成機(jī)制的角度提示其具有抗AS的作用。因此，本研究也將采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的方法，探討富硒大蒜對(duì)ox-LDL造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的兩個(gè)主要特征——細(xì)胞活性下降和細(xì)胞凋亡的影響。
　　 研究目的：
　　 1.收集有關(guān)含硒或大蒜制品防治冠心病的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分

6、析，探討使用含硒或大蒜制品能否有效防治冠心病，以期評(píng)價(jià)二者抑制AS形成與發(fā)展的作用，進(jìn)而從一定程度上為富硒大蒜抗AS作用提供理論基礎(chǔ)。
　　 2.采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的方法，探討富硒大蒜對(duì)ox-LDL的抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性和促細(xì)胞凋亡作用的影響，同時(shí)比較富硒大蒜、普通大蒜與有機(jī)硒的單獨(dú)或聯(lián)合使用等四種處理措施在相同條件下的作用，為今后防治AS的研究提供依據(jù)。
　　 研究?jī)?nèi)容和方法：
　　 一、含硒或大蒜制品治療冠心病效果

7、的Meta分析
　　 從中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、PubMed等七種中英文數(shù)據(jù)庫(kù)中，檢索出2012年1月1日前公開(kāi)發(fā)表的，以使用含硒或大蒜制品防治冠心病為研究?jī)?nèi)容的中英文隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)文獻(xiàn)。對(duì)檢索到的文獻(xiàn)進(jìn)行納入、排除和質(zhì)量評(píng)價(jià)，從符合入選標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)中提取相關(guān)數(shù)據(jù)資料，經(jīng)異質(zhì)性檢驗(yàn)后進(jìn)行定量合并，必要時(shí)進(jìn)行亞組分析和敏感性分析，以Egger's檢驗(yàn)評(píng)價(jià)發(fā)表偏倚。全部統(tǒng)計(jì)分析采用STATA11.2軟件進(jìn)行。
　　 二、

8、富硒大蒜抗ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　 采用有機(jī)溶劑萃取法提取富硒大蒜油和普通大蒜油。氫化物發(fā)生原子熒光法測(cè)定富硒大蒜油中的硒含量。甲基四唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)富硒大蒜油在不同濃度、不同作用時(shí)間下對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304細(xì)胞活性率的影響。采用4×3×3析因設(shè)計(jì)，檢測(cè)富硒大蒜油、普通大蒜油、有機(jī)硒、普通大蒜油和有機(jī)硒聯(lián)用四種處理措施在24、48、72小時(shí)三種作用時(shí)間，低、中、高三種濃度下對(duì)ox-LDL

9、造成的ECV-304細(xì)胞活性下降的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)富硒大蒜油、普通大蒜油、有機(jī)硒單獨(dú)或聯(lián)合使用等四種處理措施對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響。
　　 研究結(jié)果：
　　 一、含硒或大蒜制品防治冠心病效果的Meta分析
　　 1.含硒制品防治冠心病效果的Meta分析
　　 1.1異質(zhì)性檢驗(yàn)及定量合并結(jié)果:共8篇文獻(xiàn)納入研究，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=40.9％，合并RR=0.87(0.74，1.02)。

10、>　　 1.2亞組分析結(jié)果:按研究設(shè)計(jì)類型為臨床試驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)進(jìn)行亞組分析，合并RR值及其95％可信區(qū)間分別為0.61(0.45，0.83)和0.99(0.82，1.20)。
　　 1.3敏感性分析結(jié)果:剔除4篇質(zhì)量較低的文獻(xiàn)后，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0.0％，RR=0.97(0.81，1.16)，與剔除前的結(jié)果相比較變化不大。
　　 1.4發(fā)表偏倚檢測(cè):漏斗圖上可見(jiàn)各研究分布不對(duì)稱，Egger's檢驗(yàn)的P值為0.004

11、，提示存在發(fā)表偏倚。
　　 2.大蒜制品防治冠心病效果的Meta分析
　　 2.1異質(zhì)性檢驗(yàn)及定量合并結(jié)果:共7篇文獻(xiàn)納入研究，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2＝13.9％，合并RR=0.75(0.51，1.10)。
　　 2.2敏感性分析:剔除1篇現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)文獻(xiàn)后，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0.0％，RR=0.64(0.42，0.99)，與剔除前的結(jié)果相比較，變化較大。
　　 2.3發(fā)表偏倚檢測(cè):從繪制的漏斗圖上可見(jiàn)各研究分

12、布對(duì)稱，Egger's檢驗(yàn)的P值為0.936，提示不存在發(fā)表偏倚。
　　 二、富硒大蒜抗ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　 1.大蒜油中硒含量的檢測(cè):富硒大蒜油中硒含量為198mg/kg。
　　 2.富硒大蒜油對(duì)ECV-304細(xì)胞活性率的影響:作用24和48小時(shí)、濃度低于160μl/L時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞活性率均高于100％;在濃度達(dá)到320μl/L或作用時(shí)間為72小時(shí)時(shí)，細(xì)胞活性率均低于100％。
　

13、　 3.富硒大蒜油抗ox-LDL的造成細(xì)胞活性率下降的影響:富硒大蒜油各濃度組在各種作用時(shí)間條件下的細(xì)胞活性率均高于ox-LDL組（P＜0.05）。盡管差異未必均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但富硒大蒜油組在各種條件下的細(xì)胞活性率均呈現(xiàn)出高于普通大蒜、普通大蒜和有機(jī)硒聯(lián)用的趨勢(shì)。在15μl/L、作用時(shí)間為24小時(shí)時(shí)，有機(jī)硒組的細(xì)胞活性率低于富硒大蒜油(P=0.003)，而在濃度為60μl/L時(shí)，富硒大蒜油的細(xì)胞活性率低于有機(jī)硒(P＜0.05)。

14、>　　 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果:富硒大蒜油單獨(dú)作用下的細(xì)胞凋亡率與空白對(duì)照組相比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但明顯低于ox-LDL組(P＜0.05)。富硒大蒜油與ox-LDL共同作用下的細(xì)胞凋亡率明顯低于ox-LDL組(P＜0.01)，但與空白對(duì)照組和其他處理組間均無(wú)差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.含硒制品和大蒜制品均具有緩解冠心病患者臨床癥狀的作用。
　　 2.富硒大蒜在作用時(shí)

15、間短、濃度低時(shí)，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞活性增加。當(dāng)作用時(shí)間長(zhǎng)或濃度高時(shí)，則會(huì)抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性。
　　 3.富硒大蒜能夠?qū)筼x-LDL的抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性作用和促細(xì)胞凋亡作用。富硒大蒜或許可以通過(guò)這一機(jī)制，起到抗AS的作用。
　　 4.在短時(shí)間、低濃度的作用條件下，富硒大蒜對(duì)抗ox-LDL的抑制細(xì)胞活性作用的效果具有優(yōu)于普通大蒜、普通大蒜和有機(jī)硒聯(lián)合使用的趨勢(shì)，僅在濃度較高時(shí)較有機(jī)硒差。富硒大蒜對(duì)抗ox-LDL的促細(xì)胞凋亡作用的效