超聲對(duì)APP-PS1模型小鼠腦內(nèi)老年斑形成的影響.pdf

1、目的:
　　1.判斷APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的臨床前期，為以后基于APP/PS1模型小鼠的早期干預(yù)奠定基礎(chǔ);
　　2.評(píng)價(jià)超聲對(duì)處于臨床前期APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠早期干預(yù)的有效性。
　　方法:
　　1.依據(jù)美國(guó)國(guó)立老年研究院-阿爾茲海默病協(xié)會(huì)(National Institute of Aging-Alzheimer's Association，NIA-AA)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)際工作組(International W

2、orking Group，IWG)2標(biāo)準(zhǔn)，以一月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠及同齡非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈鬄閷?shí)驗(yàn)開始批次，依次對(duì)遞增一個(gè)月月齡的兩組同齡小鼠進(jìn)行Y迷宮行為學(xué)測(cè)試認(rèn)知記憶能力、酶聯(lián)免疫復(fù)合反應(yīng)測(cè)量淀粉樣蛋白含量和免疫組化測(cè)定老年斑來(lái)判斷APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的阿爾茲海默病臨床前期;判斷標(biāo)準(zhǔn)為同齡小鼠間行為學(xué)無(wú)差異，而淀粉樣蛋白含量或老年斑有差異;
　　2.依據(jù)實(shí)驗(yàn)參數(shù)及食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Ad

3、ministration，F(xiàn)DA）相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，研制一套配備超聲治療頭的超聲實(shí)驗(yàn)裝置，然后應(yīng)用該裝置對(duì)處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行超聲干預(yù)，干預(yù)參數(shù)為:①功率:P=0.3W/cm2;②頻率:f=1MHz;③作用時(shí)間:每次10min，一共持續(xù)6周(week，w);同時(shí)設(shè)立對(duì)照組以驗(yàn)證早期干預(yù)的有效性;
　　3.通過(guò)兩種行為學(xué)評(píng)價(jià)方法—水迷宮和Y迷宮，評(píng)價(jià)治療超聲對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠認(rèn)知記憶能力的影響;通過(guò)酶聯(lián)免疫復(fù)合反應(yīng)測(cè)定小鼠腦

4、中的淀粉樣蛋白含量;通過(guò)免疫組化判斷小鼠腦內(nèi)老年斑，以綜合判斷超聲早期干預(yù)的有效性。
　　結(jié)果:
　　1.三批小鼠的Y迷宮行為學(xué)之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);一月齡、二月齡及三月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠與同齡對(duì)照組小鼠的腦部海馬區(qū)域均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)老年斑，一月齡和二月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠與同齡對(duì)照組小鼠相比，其腦內(nèi)淀粉樣蛋白含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，而三月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦中的淀粉樣蛋白含量高

5、于同齡對(duì)照組小鼠（三月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠:1310.49±131.94pg/g，同齡對(duì)照組:700.10±101.65pg/g，P＜0.05）?？梢跃C合判斷三月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠處于阿爾茲海默病的臨床前期;
　　2.應(yīng)用自制的超聲實(shí)驗(yàn)裝置對(duì)處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行6w的超聲早期干預(yù)后，進(jìn)行干預(yù)效果的評(píng)價(jià)。①Y迷宮行為學(xué)測(cè)試，三組小鼠的行為學(xué)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=6.78，P＜0.05）。非轉(zhuǎn)

6、基因?qū)φ战M（CN組）與超聲干預(yù)APP/PS1組（US組）在交替選擇比例上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而CN組和APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因?qū)φ战M（AD組）存在交替選擇比例的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，AD組與US組存在交替選擇比例的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。②兩階段的水迷宮行為學(xué)測(cè)試。第一階段:定位航行階段檢驗(yàn)小鼠學(xué)習(xí)能力，三組小鼠尋找平臺(tái)的潛伏期之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=15.43，P＜0.05)。US組尋找平臺(tái)的潛伏期與CN組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

7、(P＞0.05)，而AD組尋找平臺(tái)的潛伏期長(zhǎng)于CN組(P＜0.05)。從第三天開始CN組的尋找平臺(tái)的潛伏期短于AD組（CN組:23.98±17.57s，AD組39.37±18.31s，P＜0.05），第四天開始US組尋找平臺(tái)的潛伏期短于AD組(US組:20.52±13.36s，AD組:38.01±18.19s，P＜0.05)，而CN組與US組之間尋找隱藏平臺(tái)的潛伏期無(wú)差異(P＞0.05);同時(shí)三組小鼠之間的游泳速度之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=

8、1.16，P＞0.05）。第二階段，三組小鼠在SE象限的停留時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（US組:16.64±6.56s，CN組:19.53±7.72s，AD組:8.89±2.47s，F(xiàn)=6.91，P＜0.05）。AD組比CN組在SE象限停留時(shí)間明顯減少(P＜0.05);且AD組在SE象限的停留時(shí)間也少于US組(P＜0.05)，US與CN組之間在SE象限的停留時(shí)間上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);三組小鼠的游泳速度之間沒(méi)有差別（F=1.44，P＞0.

9、05）。③CN組小鼠及US組小鼠腦中海馬區(qū)域未發(fā)現(xiàn)老年斑，而AD組中發(fā)現(xiàn)少量的淀粉樣蛋白沉積。④三組小鼠腦中淀粉樣蛋白含量有明顯差別(F=71.12，P＜0.001)。AD組小鼠腦中的淀粉樣蛋白高于CN組（AD組:4201.24±700.87pg/g，CN組:769.83±120.50pg/g，P＜0.001），經(jīng)超聲處理過(guò)后的US組APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦中淀粉樣蛋白含量水平低于AD組（US組:1371.26±229.97pg/g

10、，P＜0.001），處理過(guò)后US組小鼠腦中的淀粉樣蛋白含量與CN組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.通過(guò)行為學(xué)測(cè)試和生化指標(biāo)的檢測(cè)配合，能夠初步判定APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的AD臨床前期開始時(shí)間為三月齡;
　　2.對(duì)處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行早期超聲干預(yù)后，其行為學(xué)和生化指標(biāo)結(jié)果表明，超聲能夠改善處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知行為能力，且能有效促使小鼠腦中的淀粉