噁唑烷酮類NAAA抑制劑抗中樞炎癥的藥效評價與機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:目前研究證明在多種中樞系統(tǒng)疾病中都存在炎癥過程，學(xué)界普遍認(rèn)可中樞系統(tǒng)炎癥與膠質(zhì)細(xì)胞過度激活有關(guān)。N-棕櫚酰乙醇胺(N-palmitoylethanolamide，PEA)是一種近年來備受關(guān)注的內(nèi)源性脂質(zhì)，多項臨床研究及基礎(chǔ)研究證明，PEA可以通過激活PPAR-α有效抑制中樞膠質(zhì)細(xì)胞的活化，緩解多種中樞系統(tǒng)性疾病?？梢酝ㄟ^抑制PEA特異性水解酶N-?；掖及罚∟AAA）的活性提高體內(nèi)PEA的水平，為治療中樞炎癥提供有效策略。然而

2、，由于缺乏NAAA敲除鼠和生物學(xué)穩(wěn)定的NAAA抑制劑，NAAA-PEA途徑在中樞的作用和機(jī)制目前尚不清楚。
　　目的:通過課題組前期設(shè)計合成的新型噁唑烷酮類NAAAA抑制劑F96，初步評價抗中樞炎癥藥效與機(jī)制，為臨床治療中樞炎癥相關(guān)疾病提供新的治療靶標(biāo)，同時也為發(fā)展具有自主知識產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新藥物奠定理論和實驗基礎(chǔ)。
　　方法:以F96為工具藥物，通過建立LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞、小鼠腹腔原代巨噬細(xì)胞以及小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)

3、胞炎癥模型，TPA誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹炎癥模型和LPS誘導(dǎo)小鼠系統(tǒng)性炎癥模型，使用Real-Time PCR法和ELISA法檢測炎癥因子的表達(dá)，評價NAAA抑制劑在外周與中樞的抗炎作用;使用LC-MS檢測機(jī)體內(nèi)F96分布、內(nèi)源性脂質(zhì)的含量變化、評價NAAA活性，研究F96對內(nèi)源性脂質(zhì)及其代謝酶的影響;使用Western Blot檢測腦內(nèi)GFAP、PPAR-α和TLR-4等蛋白表達(dá)，使用免疫熒光檢測腦內(nèi)Iba-1蛋白的表達(dá)，使用PPAR-α基

4、因敲除鼠，研究NAAA-PEA-PPAR-α途徑對中樞炎癥的作用與機(jī)制。
　　結(jié)果:F96能夠有效抑制LPS誘導(dǎo)的RAW246.7巨噬細(xì)胞與小鼠腹腔原代巨噬細(xì)胞炎癥因子TNF-α與IL-6基因與蛋白的表達(dá);F96可以有效抑制LPS誘導(dǎo)的系統(tǒng)性炎癥與TPA誘導(dǎo)的小鼠炎性耳腫脹并降低促炎性因子的表達(dá)，在外周與中樞系統(tǒng)均可以發(fā)揮抗炎作用;F96在機(jī)體內(nèi)主要分布在NAAA高表達(dá)的外周系統(tǒng)，但可以通過血腦屏障，在腦內(nèi)有一定分布;F96可以提

5、高中樞PEA水平，提高PPAR-α表達(dá)，下調(diào)TLR-4蛋白，發(fā)揮抗炎作用;在PPAR-α敲除鼠中F96抗中樞炎癥的作用完全消失，表明了PPAR-α介導(dǎo)了F96的抗炎作用，同時熒光素酶報告基因和蛋白結(jié)合實驗證明，F(xiàn)96不是PPAR-α的直接激動劑;F96在機(jī)體內(nèi)對其他內(nèi)源性脂質(zhì)AEA、2-AG與OEA沒有顯著影響，可避免不必要的中樞副作用;F96能夠顯著降低GFAP和Iba-1以及LPS誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)。
　　結(jié)論