噁唑烷酮類NAAA抑制劑的設(shè)計(jì)合成及藥效和毒性評價(jià).pdf

1、背景：N-棕櫚酰乙醇胺（N-palmitoylethanolamide，PEA）是一種內(nèi)源性的脂質(zhì)，通過抑制內(nèi)源性大麻素水解酶N-酰基乙醇胺水解酶(NAAA)的活性可有效提高細(xì)胞和動(dòng)物機(jī)體內(nèi)PEA濃度，從而發(fā)揮鎮(zhèn)痛，抗炎，抗癲癇，神經(jīng)保護(hù)等作用。然而現(xiàn)有的NAAA抑制劑活性低、穩(wěn)定性差，無法應(yīng)用于整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和口服給藥，所以研制出新型的NAAA抑制劑成了當(dāng)務(wù)之急。
　　目的：本研究通過設(shè)計(jì)合成一系列噁唑烷酮類NAAA抑制劑，從中尋

2、找到結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，活性強(qiáng)，毒副作用小的化合物，能夠應(yīng)用于整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和口服給藥的新型NAAA抑制劑。
　　方法：在課題組已合成的NAAA抑制劑結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，以噁唑烷酮為母核進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，采用化學(xué)合成的方法合成NAAA抑制劑;使用LC-MS聯(lián)用技術(shù)建立化合物的檢測方法，評價(jià)其在pH5.0和pH7.4及血漿中的穩(wěn)定性，分析其在細(xì)胞中的代謝及產(chǎn)物;使用LC-MS/MS檢測組織樣本中內(nèi)源性大麻素含量;用TPA建立小鼠耳腫脹模型，Real-tim

3、e PCR檢測組織中相關(guān)炎癥因子的表達(dá);利用CCK-8試劑盒檢測化合物的細(xì)胞毒性，用斑馬魚模型評價(jià)化合物的胚胎毒性，用全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)評價(jià)化合物的心臟毒性，使用小鼠曠場實(shí)驗(yàn)評價(jià)化合物的依賴性。
　　結(jié)果：合成并篩選出了一個(gè)活性好、選擇性強(qiáng)且穩(wěn)定好的化合物F96(IC50 ofNAAA=0.210μM，IC50 of FAAH=41.84μM);在pH5.0、pH7.4和血漿中的半衰期分別為:t1/2(pH=5.0)＞1440 mi

4、n，t1/2(pH=7.4）＞1440 min，t1/2(Rat plasma)=188 min;腹腔注射F96能劑量依賴地減輕TPA誘導(dǎo)的耳腫脹，且能夠劑量依賴地提高腫脹部位PEA水平;口服F96能抑制TPA誘導(dǎo)的耳腫脹，顯著降低腫脹部位炎癥因子的表達(dá)，抗炎效果比布洛芬好;100μM F96對細(xì)胞幾乎沒有毒性;相比于布洛芬，F(xiàn)96對斑馬魚胚胎胚胎發(fā)育毒性明顯減小;F96對hERG鉀通道的IC50大于40μM，幾乎沒有心臟毒性;F96對