冬凌草甲素誘導(dǎo)胃癌SGC-7901細(xì)胞DNA損傷與自噬的研究.pdf

1、目的：研究冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的抑制作用以及誘導(dǎo)DNA損傷的影響，探求冬凌草甲素是否能夠誘導(dǎo)胃癌SGC-7901細(xì)胞發(fā)生自噬。
　　方法：（1）MTT法及結(jié)晶紫法檢測冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖活性的影響。（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細(xì)胞周期的影響。（3）吖啶橙法檢測自噬酸性囊泡。（4） Western blot檢測DNA損傷相關(guān)蛋白γH2AX（S139）、phospho-

2、ATM（S1981）、phospho-P53（S15）、phospho-CHK2（T68）、phospho-cdc2(Y15)、phospho-cdc25c（S216）以及自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1表達(dá)量的變化。（5）細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗檢測冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細(xì)胞DNA損傷相關(guān)蛋白phospho-ATM（S1981）和γ-H2AX（S139）焦點(diǎn)形成的影響。
　　結(jié)果：（1）MTT結(jié)果顯示不同濃度

3、冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細(xì)胞均有不同程度的抑制作用，其抑制作用具有濃度依賴關(guān)系.（2）結(jié)晶紫染色結(jié)果顯示隨藥物濃度增高，細(xì)胞密度逐漸減小，顯示OD值逐漸減小。（3）流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示隨著藥物濃度的升高，G0/G1期細(xì)胞逐漸減少，G2/M期細(xì)胞逐漸增多，在40μM達(dá)到阻滯最高峰，表現(xiàn)為G2/M期阻滯。（4）吖啶橙檢測自噬結(jié)果顯示酸性自噬囊泡的數(shù)量呈濃度依賴性增高。（5）Western blot結(jié)果顯示DNA損傷相關(guān)蛋白γH2AX（

4、S139）、phospho-ATM（S1981）、phospho-P53（S15）、phospho-CHK2（T68）、phospho-cdc2(Y15)、phospho-cdc25c（S216）蛋白水平呈濃度依賴性增高，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅰ蛋白水平呈劑量依賴性減少、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平呈濃度依賴性增多、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比例減??；（6）免疫熒光結(jié)果發(fā)現(xiàn)phospho-ATM（S1981）、γH2AX（S139）焦點(diǎn)