大黃素對STZ大鼠腎臟組織Toll樣受體4、NF-κB及白細胞介素-6表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察大黃素對STZ大鼠腎臟組織Toll樣受體4（TLR4）、NF-κB及白細胞介素-6(IL-6)表達的影響，闡述其防治糖尿病腎臟病變的可能作用機制，為臨床應用清熱類中藥防治糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)慢性并發(fā)癥提供理論依據(jù)。
　　方法：50只成年雄性Wistar大鼠，隨機分成兩組，其中10只為正常對照組，40只為造模組。造模組大鼠禁食12h后，一次性腹腔注射1％鏈脲佐菌素STZ60mg/

2、kg（臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液，配制STZ溶液，濃度為1％、pH＝4.2），正常對照組腹腔注射同等劑量檸檬酸鈉緩沖液。72h后，用血糖儀測尾靜脈，血糖≥16.7mmol/L者確定為糖尿病大鼠，未達此標準者予以排除。成模后，隨機抽取20只，分為糖尿病模型組（10只），大黃素干預組（10只）。大黃素干預組按100mg/（kg體重）灌胃，正常對照組和糖尿病模型組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間，各組大鼠自由進食進水。連續(xù)灌胃8周后

3、，禁食12h，所有大鼠腹腔注射戊巴比妥（3％、80mg/kg）進行麻醉，開腹，于腹主動脈采血，取5~6 mL測血糖、血脂、肝功能、腎功能水平，剪開后腹膜，取下左側腎臟，稱量腎重，計算相對腎重（腎重/體重），并以4%多聚甲醛固定，以免疫組化染色 SP法處理腎臟組織切片，并觀察病理切片中 TLR4、NF-κB、IL-6陽性表達。計量資料均采用X——±S表示，各組干預前后的比較采用配對 t檢驗；各組間比較采用單因素方差分析，方差不齊時采用Kr

4、uskal-Wallis H檢驗，所有數(shù)據(jù)用SPSS21.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準α=0.05。
　　結果：
　　1.對大鼠一般狀態(tài)的影響
　　正常對照組大鼠皮毛光澤，反應靈敏，飲食、活動均正常，體質量增加明顯。糖尿病模型組及大黃素干預組大鼠皮毛暗淡欠光澤，飲水、攝食均增加約2倍左右，尿量增多2-3倍，大便稀軟，反應遲緩，體質量增加緩慢，抱團少動。
　　2.對血糖的作用
　　治療前，與正常對照組相比，糖尿病

5、模型組、大黃素干預組血糖明顯升高（P<0.05）；大黃素干預組與糖尿病模型組相比血糖無明顯差異（P>0.05）。治療后，與正常對照組相比，糖尿病模型組、大黃素干預組血糖明顯升高（P<0.05）；大黃素干預組與糖尿病模型組相比，血糖無明顯差異（P>0.05）。各組大鼠治療前后血糖無明顯差異（P>0.05）。
　　3.對血脂的作用
　　對膽固醇的影響：灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組、大黃素干預組膽固醇無明顯差異（

6、P>0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預組膽固醇無明顯差異（P>0.05）；對甘油三酯的影響：治療后，與正常對照組相比，糖尿病模型組、大黃素干預組甘油三酯無明顯差異（P>0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預組甘油三酯無明顯差異（P>0.05）。
　　4.對丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、谷氨酸氨基轉移酶（AST）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）的影響
　　灌胃治療8周后，各組ALT、AST、Cr、BUN水平組間相比均

7、無明顯差異（P>0.05）。
　　5.對TLR4表達的影響
　　灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組及大黃素干預組TLR4表達明顯升高（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預組TLR4蛋白表達明顯降低（P<0.05）。
　　6.對NF-κB表達的影響
　　灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組及大黃素干預組NF-ΚB表達明顯升高（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預組NF-κB

8、蛋白表達明顯降低（P<0.05）。
　　7.對IL-6表達的影響
　　灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組及大黃素干預組IL-6表達明顯升高（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預組IL-6蛋白表達明顯降低（P<0.05）。
　　結論：
　　1.TLR4、NF-κB、IL-6蛋白在正常對照組大鼠腎臟組織中低表達，而在糖尿病模型組及大黃素干預組高表達，表明TLR4、NF-κB、IL-6參與了糖尿病