延遲應(yīng)用不同劑量rhEPO治療大鼠急性擠壓性胸脊髓損傷.pdf

1、目的：
　　全面系統(tǒng)的評(píng)估延遲應(yīng)用不同劑量的促紅細(xì)胞生成素治療大鼠急性擠壓性胸脊髓損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)將分為兩個(gè)階段進(jìn)行，在第一階段中，共有32只健康雄性SD大鼠，將其平均隨機(jī)分為4組:對(duì)照組（A組，N=8）:按脊髓擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時(shí)、1、3天給予腹腔注射生理鹽水1ml，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉(100000U/kg)，預(yù)防術(shù)后感染;3000U實(shí)驗(yàn)組（B組，N=

2、8）:按脊髓擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時(shí)、1、3天給予腹腔注射促紅細(xì)胞生成素（3000U/kg），此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉(100000U/kg)，預(yù)防術(shù)后感染;4000U實(shí)驗(yàn)組（C組，N=8）:按脊髓擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時(shí)、1、3天給予腹腔注射促紅細(xì)胞生成素（4000U/kg），此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉（100000U/kg），預(yù)防術(shù)后感染;5000U實(shí)驗(yàn)組（D組，N=8）:按脊髓

3、擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時(shí)、1、3天給予腹腔注射促紅細(xì)胞生成素(5000U/kg)，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉（100000U/kg），預(yù)防術(shù)后感染。在第二階段實(shí)驗(yàn)中，按與第一階段同樣實(shí)驗(yàn)的方法，將24只健康雄性SD大鼠同樣隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(Aa組，n=6):按照第一階段相同的造模方法，造模成功后，給予脊髓損傷大鼠1ml生理鹽水腹腔注射在術(shù)后2小時(shí)、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射

4、青霉素鈉（100000U/kg），預(yù)防術(shù)后感染;3000U（Bb組，n=6）:脊髓損傷大鼠被給予促紅細(xì)胞生成素(3000U/kg)通過(guò)腹腔注射在術(shù)后2小時(shí)、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉(100000U/kg)，預(yù)防術(shù)后感染;4000U（Bb組，n=6）:脊髓損傷大鼠被給予促紅細(xì)胞生成素(4000U/kg)通過(guò)腹腔注射在術(shù)后2小時(shí)、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉

5、(100000U/kg)，預(yù)防術(shù)后感染;5000U(Bb組，n=6):脊髓損傷大鼠被給予促紅細(xì)胞生成素（5000U/kg）通過(guò)腹腔注射在術(shù)后2小時(shí)、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉（100000U/kg），預(yù)防術(shù)后感染。主要的觀察及研究指標(biāo):在第一階段的實(shí)驗(yàn)SD大鼠，造模后共觀察4天，在術(shù)后-1（術(shù)前）、0、1、2、3、4天行BBB評(píng)分，術(shù)后第4天行BBB評(píng)分后予以過(guò)量的戊巴比妥鈉腹腔注射處死，取損傷

6、脊髓節(jié)段用于炎癥指數(shù)、凋亡指數(shù)、組織病理觀察及脊髓超微結(jié)構(gòu)的研究;在實(shí)驗(yàn)第二階段的SD大鼠，共被觀察4周，在術(shù)后-1、0、2、4、7、14、21、28天行BBB評(píng)分及固藍(lán)染色(LFB)。
　　脊髓損傷造模方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物先在動(dòng)物飼養(yǎng)房（溫度20±3℃，濕度50±20％，每日光照12h）內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，每籠2只大鼠，自由進(jìn)食、水。動(dòng)物于術(shù)前12小時(shí)禁食、水，為了預(yù)防術(shù)后感染，術(shù)前30min給予青霉素鈉(200000U/kg

7、)肌肉注射。戊巴比妥鈉(70mg/kg)腹腔注射麻醉后，將大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，用剪刀減去手術(shù)區(qū)域的毛發(fā)，然后用3％碘伏消毒手術(shù)區(qū)，在無(wú)菌條件下行背部正中切開(kāi)約2cm長(zhǎng)的切口，以T13為標(biāo)志，暴露T8～T12的棘突、橫突及椎板，應(yīng)用外科顯微器械，仔細(xì)去除T10的終板及黃韌帶，顯露T10水平的脊髓，用閉合力為70g的動(dòng)脈瘤夾夾持脊髓1 min，然后去除動(dòng)脈瘤夾，生理鹽水沖洗切口后逐層縫合切口，再次用3％碘伏消毒手術(shù)切口。在手術(shù)期間，用

8、一個(gè)加熱墊來(lái)維持大鼠的體溫，直至大鼠術(shù)后完全蘇醒。術(shù)后每只大鼠立即腹腔注射10％葡萄糖注射液2ml，0.9％的氯化鈉注射液5ml，大鼠完全蘇醒后，按每籠2只送回飼養(yǎng)室，術(shù)后每天人工輔助排尿2-3次/日。
　　療效評(píng)估指標(biāo)：
　　BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分、組織病理評(píng)級(jí)、凋亡指數(shù)、炎癥指數(shù)、脊髓超微結(jié)構(gòu)評(píng)分及脫髓鞘面積;
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：
　　SPSS19.0((SPSS Inc.，Chicago，IL，USA))統(tǒng)計(jì)學(xué)軟

9、件被用于分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。除了組織病理學(xué)評(píng)級(jí)結(jié)果，其他數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，在不同的研究時(shí)間點(diǎn)的BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的兩因素的ANOVA and post hoc LSD檢驗(yàn)，膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)、神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)、脊髓超微結(jié)構(gòu)評(píng)分用one-way ANOVA and post hoc LSD檢驗(yàn)。對(duì)于非參數(shù)數(shù)據(jù)包括炎癥指數(shù)、凋亡指數(shù)、組織病理評(píng)級(jí)、脫髓鞘面積百分比則用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)比較組間差異，如果

10、方差分析顯示:組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組之間的比較則用多個(gè)獨(dú)立樣本之間比較的Nemenyi檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0.05時(shí)，則表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　在第一階段實(shí)驗(yàn)中，32只SD大鼠共被觀察4天，各實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分在術(shù)后第4天分別為:A組(0.375±0.518);B組(2.625±0.744);C組(3.125±0.641);D組(4.500±0.756)，且在整個(gè)4天的研究期間，最好的運(yùn)動(dòng)功能

11、評(píng)分被觀察到在D組，此外，各實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)功能的改善均好于A組(P＜0.01)在此期間。在第二階段實(shí)驗(yàn)中，24只脊髓損傷SD大鼠共被觀察4周，在術(shù)后第28天的BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分分別為:Aa組(7.833±1.472); Bb組(12.333±0.816); Cc組(12.833±0.753); Dd組(14.500±0.548)，最好的運(yùn)動(dòng)功能改善情況同樣在Dd組被觀察到，各實(shí)驗(yàn)組的運(yùn)動(dòng)功能改善情況均好于Aa組(P＜0.001)，此外，在第

12、一和第二階段的實(shí)驗(yàn)中，3000U組和4000U組在改善急性胸脊髓損傷的大鼠運(yùn)動(dòng)功能方面作用相似(P＞0.05)，盡管4000U組平均BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分稍微高于3000U組。組織病理學(xué)方面，5000U組獲得最好的組織病理學(xué)改善，而3000U組和4000單位組在組織病理學(xué)改善方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但各實(shí)驗(yàn)組的病理改善情況好于對(duì)照組(P＜0.05)。各實(shí)驗(yàn)組的炎癥指數(shù)及凋亡指數(shù)均小于對(duì)照組(P＜0.05)，但各實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)

13、學(xué)差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組的脊髓損傷超微結(jié)構(gòu)評(píng)分均好于對(duì)照組(P＜0.001)，但各實(shí)驗(yàn)組在改善脊髓損傷超微結(jié)構(gòu)方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。就脫髓鞘面積百分比而言，實(shí)驗(yàn)組的脊髓損傷超微結(jié)構(gòu)評(píng)分均好于對(duì)照組(P＜0.005)，且最好的髓鞘保護(hù)作用在5000U組被觀察到。
　　結(jié)論：
　　(1)、延遲應(yīng)用促紅細(xì)胞生成素治療急性大鼠胸脊髓損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用;
　　(2)、延遲應(yīng)用促紅細(xì)胞生成素具有降低細(xì)胞凋亡、調(diào)