促紅細(xì)胞生成素治療大鼠脊髓損傷劑量一效應(yīng)關(guān)系的研究.pdf

1、目的：建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，并于硬膜下腔給予重組人促紅細(xì)胞生成素(rh-EPO)，研究rh-EPO對(duì)大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)、病理改變及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響，探討rh-EPO治療脊髓損傷的治療效果、最佳治療劑量及二者之間的關(guān)系，為臨床治療急性脊髓損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴脊髓半橫斷損傷模型：在顯微鏡下，應(yīng)用顯微刀片對(duì)大鼠T10脊髓行右側(cè)半橫斷損傷，并于硬膜下腔放置自制注射管。⑵將80只成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分

2、為5組(n=16)，即假手術(shù)組、NS對(duì)照組、小劑量EPO治療組、中劑量EPO治療組、大劑量EPO治療組，除假手術(shù)組外其余均行脊髓半橫斷損傷。其中假手術(shù)組僅行椎板去除，不予藥物治療；NS對(duì)照組按照不同給藥時(shí)間點(diǎn)(術(shù)后30min內(nèi)、術(shù)后1d、術(shù)后3d、術(shù)后7d)于硬膜下腔置管內(nèi)緩慢注射生理鹽水，每次50μl；小、中、大劑量EPO治療組按上述給藥時(shí)間點(diǎn)于硬膜下腔置管內(nèi)給予rh-EPO。每次給藥時(shí)，分別將100IU/kg、500IU/kg、10

3、00IU/kg rh-EPO加枸櫞酸納緩沖液至50μl后，相應(yīng)緩慢地注入小、中、大劑量EPO治療組大鼠硬膜下腔。各組大鼠均于術(shù)后14d處死。⑶所有大鼠均于傷前、傷后定期進(jìn)行BBB行為學(xué)評(píng)分，連續(xù)觀察2w脊髓損傷大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。大鼠處死后，損傷脊髓組織經(jīng)石蠟包埋切片，采用HE染色觀察其病理改變，并應(yīng)用原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)標(biāo)記損傷組織凋亡細(xì)胞，在光鏡下統(tǒng)計(jì)并分析結(jié)果，計(jì)算凋亡指數(shù)(ApoptoticIndex，AI)

4、。采用t檢驗(yàn)(Student's t-test)比較兩組數(shù)據(jù)之間的差異性，用方差分析(analysis of variance，ANOVA)比較多組數(shù)據(jù)間的差異性，P<0.05即認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01即認(rèn)為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：①大鼠脊髓半橫斷損傷模型成功穩(wěn)定，重復(fù)性好，且傷口整齊，損傷程度恒定，解剖定位準(zhǔn)確，功能障礙亦確定。②BBB評(píng)分結(jié)果顯示：與術(shù)后1d相比較，各治療組術(shù)后3d、7d及14d的BB

5、B評(píng)分明顯增加(P<0.01)；小劑量EPO治療組較NS對(duì)照組BBB評(píng)分增加(P<0.05)；中、大劑量EPO治療組與NS對(duì)照組及小劑量EPO組相比較，BBB評(píng)分增加明顯(P<0.01)；中、大劑量EPO治療組之間比較，BBB評(píng)分無(wú)明顯改變(P>0.05)。③HE染色顯示：假手術(shù)組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)元形態(tài)完好，尼氏小體清晰可見，外周白質(zhì)區(qū)軸突正常；損傷組表現(xiàn)為脊髓組織水腫、彌漫性出血，囊腔及空泡形成，神經(jīng)元變性乃至消失，尼氏小體

6、分辨不清，周圍大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，星形膠質(zhì)細(xì)胞大量增生，膠質(zhì)癱痕形成，軸索退變，軸索與髓鞘之間空隙加大；EPO治療組創(chuàng)傷病理表現(xiàn)較NS對(duì)照組輕；中、大劑量EPO組較小劑量組輕。④凋亡細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示：假手術(shù)組偶見陽(yáng)性細(xì)胞；損傷組白質(zhì)中及空洞周邊可見大量陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。與NS對(duì)照組相比較，小劑量EPO組的凋亡細(xì)胞數(shù)及AI降低(P<0.05)；中、大劑量EPO組明顯低于NS對(duì)照組及小劑量EPO組(P<0.01)；中、大劑量EPO組之間比較，凋亡

7、細(xì)胞數(shù)及AI無(wú)明顯差異(P>0.05)。⑤相關(guān)性分析顯示：BBB評(píng)分有隨凋亡細(xì)胞數(shù)目減少而增加的趨勢(shì)，二者呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論：⑴大鼠脊髓半橫斷損傷模型適于進(jìn)行脊髓損傷的基礎(chǔ)理論研究和神經(jīng)生物學(xué)觀察。⑵rh-EPO有助于脊髓損傷大鼠BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分的增加，促進(jìn)大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。⑶rh-EPO能改善大鼠脊髓損傷組織的病理改變。⑷rh-EPO能減輕大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡，降低凋亡指數(shù)。⑸BBB評(píng)分有隨凋亡細(xì)胞數(shù)目減少而增加的