不同劑量甲潑尼龍對大鼠急性肺損傷治療效果及肺泡巨噬細(xì)胞在其中的作用.pdf

1、目的：觀察不同劑量甲潑尼龍(methylprednisolone，MPL)對大鼠急性肺損傷(acute lung injury，ALI)治療效果的差異，并探討不同劑量MPL對肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophages，AM)影響的不同在其中的作用。
　　方法：90只雄性成年清潔級大鼠隨機分為5組(n=18)：對照組(NS組)、損傷組(LPS組)、小劑量治療組(LPS+MPL3mg組)、中劑量治療組(LPS+MPL30m

2、g組)、大劑量治療組(LPS+MPL180mg組)。尾靜脈注射脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)5mg/kg/d(連續(xù)三天)制作急性肺損傷模型。首次尾靜脈注射LPS1h后，三個治療組分別連續(xù)腹腔注射MPL3mg/kg/d(LPS+MPL3mg組)、30mg/kg/d(LPS+MPL30mg組)或180mg/kg/d(LPS+MPL180mg組)；三天后，每天同一時間各治療組腹腔注射相應(yīng)劑量MPL。LPS組尾靜脈注射

3、LPS1h后，連續(xù)腹腔注射生理鹽水(normal saline，NS)2ml/kg/d，三天后，每天同一時間相應(yīng)劑量NS。對照組：尾靜脈、腹腔分別注射相應(yīng)容量的NS。于制模后12h、7d和14d各組隨機處死6只大鼠并取材。
　　實驗期間每日觀察動物稱取體重，在規(guī)定時間處死動物后，結(jié)扎右側(cè)主支氣管，行左側(cè)支氣管肺泡灌洗，收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，取40μl灌洗液，20μl用

4、于計數(shù)BALF中細(xì)胞總數(shù)，20μl進行Wright-Giemsa染色觀察AM比例；余下BALF離心后取上清采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測Ⅲ型前膠原(procollagen typeⅢ，PCⅢ)含量；細(xì)胞沉淀進行AM提取，用吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色法檢測AM凋亡情況、髓過氧化物酶染色法檢測AM對凋亡中性粒細(xì)胞的吞噬活性。右肺中葉稱濕、干重，用于計算肺濕/干重比；下葉通過HE染色，觀察肺組織病理學(xué)改變。
　　結(jié)果：(1)腹腔注

5、射3mg和30mg MPL能有效抑制ALI大鼠體重下降趨勢并于造模9d后明顯高于LPS組(P<0.05)，而這兩組之間無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)；與以上兩組相比腹腔注射180mgMPL使ALI大鼠體重下降更明顯(P<0.05)，在造模8d后明顯低于其他各治療組及LPS組(P<0.05)，并呈不斷下降趨勢。(2)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減輕ALI大鼠右肺中葉濕/干重比(P<0.05)，到造模后14d時

6、與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間在造模7d、14d時無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)；腹腔注射180mgMPL使肺濕/干重比在造模7d、14d時持續(xù)升高，并高于其他兩個治療組(P<0.05)，到造模后14d后時已明顯高于LPS組。(3)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減輕ALI大鼠右肺下葉病理學(xué)評分，到造模后14d時與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間也無有統(tǒng)計

7、學(xué)意義的差異(P>0.05)；腹腔注射180mgMPL卻使ALI大鼠右肺下葉病理學(xué)評分在造模7d、14d時持續(xù)升高并高于其他兩個治療組(P<0.05)，到造模后14d時已明顯高于LPS組。(4)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減少ALI大鼠BALF中PCⅢ的含量，到造模后14d時與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間沒有有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)；腹腔注射180mgMPL使ALI大鼠BA

8、LF中PCⅢ的含量在造模7d、14d時持續(xù)升高并高于其他兩個治療組(P<0.05)，到造模后14d時已明顯高于LPS組。(5)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減少ALI大鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)，到造模后14d時與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間在造模7d、14d時無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)；腹腔注射MPL180mg使ALI大鼠7d、14d時持續(xù)升高并高于其他兩個治療組(P<0.05

9、)，到造模后14d時已明顯高于LPS組。(6)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL的ALI大鼠BALF中的AM比例在12h明顯下降(P<0.05)，但在造模7d及14d時逐漸回升，其中LPS+MPL3mg組到造模后14d時明顯高于其他兩個治療組并與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)；腹腔注射MPL180mg使ALI大鼠BALF中的AM比例持續(xù)下降，并明顯低于其他各組(P<0.05)。(7)與LPS組相比，腹腔注射30

10、mg和MPL180mg能明顯促進大鼠AM凋亡(P<0.05)且明顯高于LPS+MPL3mg組及其他各組(P<0.05)，而LPS+MPL3mg組到造模14d時AM凋亡率與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)。(8)與LPS組相比，腹腔注射180mg MPL能明顯降低ALI大鼠AM髓過氧化物酶染色陽性率(P<0.05)，并明顯低于其他兩個治療組(P<0.05)；LPS+MPL3mg組AM髓過氧化物酶染色陽性率降低明顯高于其他兩個治

11、療組(P<0.05)，且到造模后14d時AM凋亡率與NS組已無有統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.從本研究檢測的指標(biāo)看，腹腔注射3mg和30mg MPL能有效減輕ALI大鼠的肺部損傷并減少發(fā)生肺纖維化的可能，腹腔注射180mg MPL僅能在短期內(nèi)減輕ALI大鼠的肺部損傷，到ALI中后期則會加重ALI大鼠的肺部損傷并增加發(fā)生肺纖維化的可能。2.相對于腹腔注射180mg MPL，3mg和30mg MPL促進AM的凋亡和