不同劑量百草枯染毒后大鼠急性肺、肝、腎損傷的觀察.pdf

1、目的：比較不同劑量百草枯(Paraquat PQ)染毒后大鼠肺、肝、腎組織的病理形態(tài)學(xué)(HE、TEM)變化及組織氧自由基含量變化，以判斷氧自由基含量與肺、肝、腎損傷的關(guān)系，為確定氧自由基在PQ所致組織損傷中的作用提供理論依據(jù)。
　　 方法：以我課題組此前所建的“PQ中毒致肺纖維化大鼠模型(即雄性Wistar大鼠，體重200±10g，PQ染毒劑量為25mg/kg，一次性腹腔注射，2周后大鼠肺纖維化發(fā)生率為90％以上)”為基礎(chǔ)，選取

2、低于肺纖維化大鼠模型組染毒劑量的兩個(gè)染毒劑量組及高于肺纖維化大鼠模型組的兩個(gè)染毒劑量組，共5個(gè)染毒劑量組，以及1個(gè)正常對照組為研究對象。具體方法為Wistar大鼠88只，隨機(jī)分為6組，即A組、B組、C組、D組、E組、F組，A組為正常對照組，8只，不染毒，其余5組，每組16只，染毒劑量分別為15mg/kg、20mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg，各組動物分別于染毒后4h(B1、C1、D1、E1、F1)、12h

3、(B2、C2、D2、E2、F2)腹主動脈放血處死，每組各8只。處死后快速取大鼠肺、肝、腎組織。左肺大葉稱取濕重，在80℃的烘箱里烘干后稱干重，計(jì)算肺系數(shù)(包括肺含水量、濕肺/干肺、干肺/體比、濕肺/體比)，應(yīng)用SAS軟件，t檢驗(yàn)比較組間差別；取右肺上葉寬約0.5cm與二氯熒光素雙醋酸鹽(2’，7’-dichloro-dihydrofluorescein diacetate DCFH-DA)孵育15min后，行冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察

4、熒光強(qiáng)度，判斷氧自由基的量；右肺第4葉取邊緣約1mm×1mm×1mm大小肺組織用3％戊二醛固定行透射電鏡檢測；右肺2、3葉用10％中性福爾馬林固定2天后，行HE檢測。取肝上葉寬約0.5cm的肝組織與DCFH-DA孵育15min后，行冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察熒光強(qiáng)度，判斷氧自由基的量；取邊緣1mm×1mm×1mm大小肝組織用3％戊二醛固定行透射電鏡檢測；取一葉肝用10％中性福爾馬林固定2天后，行HE檢測。左腎中間橫斷，取其一半與DCF

5、H-DA孵育15min后，行冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察熒光強(qiáng)度，判斷氧自由基的量；左腎另一半取腎皮質(zhì)1mm×1mm×1mm大小腎組織用3％戊二醛固定行透射電鏡檢測；取右腎用10％中性福爾馬林固定2天后，行HE檢測。
　　 結(jié)果：與正常對照組比較，B1、C1、D1、E1、F1、B2、C2、D2組大鼠肺系數(shù)無明顯變化，E2、F2組肺系數(shù)明顯增高，P<0.05。隨PQ染毒劑量的升高，與DCFH-DA孵育的肺、肝、腎組織冰凍切片的熒光

6、強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。病理切片(HE染色)：B1、C1、D1、E1、F1組肺泡腔內(nèi)有蛋白水腫液的滲出、透明膜形成，白細(xì)胞浸潤不明顯，肺泡間隔仍為單層細(xì)胞，略增厚，不同染毒劑量組滲出液量差別不顯著，B2、C2、D2、E2、F2組肺內(nèi)白細(xì)胞浸潤明顯，肺出血、毛細(xì)血管的擴(kuò)張充血，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹均明顯，且隨染毒劑量的增加，肺泡炎癥浸潤明顯加重，E2及F2組肺泡腔幾乎消失，肺出血明顯。透射電鏡可見染毒劑量越高肺組織亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷越重。A組肝組織結(jié)果基本正常

7、，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)無異常，染毒組細(xì)胞器以水腫為主，4h和12h內(nèi)肝細(xì)胞損傷差別不明顯。A組腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，超微結(jié)構(gòu)無異常，染毒后出現(xiàn)空泡變性等損傷，損傷以水腫為主。而4h和12h內(nèi)腎組織損傷差別不明顯。
　　 結(jié)論：PQ中毒后大鼠肺、肝、腎均有損傷，損傷程度與染毒劑量相關(guān)，染毒劑量越高，組織的損傷越重。染毒劑量越大組織中的氧自由基含量越高，肺、肝、腎組織損傷程度越重，呈正相關(guān)。組織損傷以肺損傷為主，染毒后4h可見滲出性病變，肺系數(shù)