急性脊髓損傷的藥物治療研究.pdf

1、 背景急性脊髓損傷(spinalcordinjury，SCI)是指脊髓遭受到外力打擊后導(dǎo)致完全性或不完全性脊髓運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、括約肌功能障礙等，是脊柱外科領(lǐng)域中一種常見(jiàn)且破壞性極大的疾病。隨著脊髓損傷基礎(chǔ)及臨床研究的不斷深入，脊髓損傷的治療也得到不斷發(fā)展。近年，不同學(xué)者采用不同方法治療脊髓損傷病人，并取得一定的效果，也有報(bào)道一些藥物有助于脊髓損傷后功能恢復(fù)。然而所有結(jié)果仍不盡人意。為尋求一種新的治療脊髓損傷的方法，根據(jù)脊髓損傷后病理改

2、變，最大限度減少這種病理改變將是一種有效治療方法。全身性應(yīng)用藥物通過(guò)血循環(huán)途徑達(dá)到脊髓損傷部位，可能會(huì)有效的打斷脊髓損傷后病理進(jìn)程從而達(dá)到治療脊髓損傷、保護(hù)或者恢復(fù)脊髓功能的目的。為此，進(jìn)一步研究一種較好的用藥品種及用藥程式將是一種非常有前景的方法。 目的1.探討應(yīng)用藥物治療脊髓損傷行為學(xué)的改變； 2.探討應(yīng)用藥物治療脊髓損傷病理學(xué)的改變； 3.探討應(yīng)用藥物治療脊髓損傷神經(jīng)細(xì)絲及膠質(zhì)纖維酸性蛋白表達(dá)的影響；

3、 4.探討應(yīng)用藥物治療脊髓損傷對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。 5.通過(guò)結(jié)果探討不同藥物對(duì)大鼠急性脊髓損傷的治療作用，為臨床上應(yīng)用藥物治療脊髓損傷提供理論指導(dǎo)。 方法實(shí)驗(yàn)中將216只大鼠分為對(duì)照組及6種不同藥物組。采用腹腔內(nèi)藥物注射進(jìn)行麻醉后，利用改良Allen's打擊法建立大鼠急性脊髓損傷模型。手術(shù)后通過(guò)尾靜脈給予藥物。在術(shù)后8h、24h、4天、7天、14天分別進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè)：1、采用胥少汀對(duì)脊髓損傷的四肢行走動(dòng)物提出的后肢6級(jí)

4、行為學(xué)評(píng)分障礙率及Rivlin斜板障礙率對(duì)脊髓損傷大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)；2行為學(xué)評(píng)分后處死動(dòng)物取材并制作病理切片，進(jìn)行①普通HE染色切片及電鏡片，分別通過(guò)光鏡和電鏡進(jìn)行觀察；②運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行神經(jīng)細(xì)絲及膠質(zhì)纖維酸性蛋白染色，通過(guò)光鏡進(jìn)行觀察，并應(yīng)用自動(dòng)顯微圖像分析系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行組織圖像分析；③運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行凋亡小體檢測(cè)并通過(guò)自動(dòng)顯微圖像分析系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行組織圖像分析。 結(jié)果1.隨著傷后時(shí)間延長(zhǎng)，各組斜板角度均有不

5、同程度增加以及障礙率不同程度降低，各用藥組與對(duì)照組之間均有差異(P＜0.05)，但是在不同時(shí)間點(diǎn)上比較用藥組與對(duì)照組以及各用藥組之間差異不同：甲基強(qiáng)的松龍-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉-生長(zhǎng)因子組、甲基強(qiáng)的松龍組、七葉皂甙鈉組斜板角度在不同時(shí)間點(diǎn)上明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)、障礙率明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)；甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組斜板角度明顯高于其余各組(P＜0.05)；甘露醇組、生長(zhǎng)因子組與

6、對(duì)照組間差別不大。 2.病理改變：對(duì)照組傷后脊髓連續(xù)性喪失，打擊處腫脹、脊膜下出血，灰、白質(zhì)界限不清；光鏡見(jiàn)脊髓局灶性出血，神經(jīng)元核濃聚，染色增強(qiáng)，并逐漸出現(xiàn)神經(jīng)元固縮、壞死、溶解，白質(zhì)中髓鞘腫脹、水腫，有炎細(xì)胞浸潤(rùn)。甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉組、七葉皂甙鈉-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組脊髓損傷比對(duì)照組明顯輕。神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組表現(xiàn)與對(duì)照組相仿。 電鏡：對(duì)照組傷后8小時(shí)脊髓白質(zhì)神經(jīng)纖維間隙明顯擴(kuò)張，間隙中有許多

7、外滲的細(xì)胞如紅細(xì)胞；灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞減少，殘留神經(jīng)元內(nèi)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)模糊、不清晰，線粒體嵴消失或呈空泡狀、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、染色質(zhì)邊集及核碎裂。部分神經(jīng)元細(xì)胞胞漿、細(xì)胞器減少，胞膜破裂；傷后24小時(shí)髓鞘板層結(jié)構(gòu)紊亂、斷裂分層，髓鞘發(fā)生崩解，脫失，軸漿外溢，甚至出現(xiàn)空泡；傷后96小時(shí)后傷部水腫及結(jié)構(gòu)破壞有所減輕，軸突腫脹，軸質(zhì)呈不均質(zhì)狀，部分溶解，神經(jīng)纖維間少突膠質(zhì)細(xì)胞明顯減少或消失；傷后7天腫脹減輕，結(jié)構(gòu)較前清晰；14天時(shí)較多脫髓鞘改變及少許

8、新生細(xì)胞。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉組、七葉皂甙鈉-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組脊髓損傷比對(duì)照組明顯輕；神經(jīng)生長(zhǎng)因子組在24小時(shí)內(nèi)與對(duì)照相似、隨時(shí)間延長(zhǎng)，超微結(jié)構(gòu)改變漸輕于對(duì)照組，甘露醇組改變始終與對(duì)照組相仿；脊髓損傷早期，甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉-神經(jīng)生長(zhǎng)因子組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變明顯輕與其余各組。 3.NF、GFAP吸光度結(jié)果表明：①脊髓損傷后8小時(shí)各組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)；②脊髓

9、損傷24小時(shí)、96小時(shí)、7天各組之間相比結(jié)果相同，為：對(duì)照組、神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其余四組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)但與對(duì)照組、神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組相比吸光度均明顯低(P＜0.05)；③脊髓損傷后14天結(jié)果為：對(duì)照組、甘露醇組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)外；其余5組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)但是與對(duì)照組、甘露醇組相比吸光度均明顯低(P＜0.05)。 4.細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果顯示①脊髓

10、損傷后8小時(shí)所有組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)；②脊髓損傷后24小時(shí)為時(shí)對(duì)照組、神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組、七葉皂甙鈉組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉-生長(zhǎng)因子組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但與對(duì)照組、神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組、七葉皂甙鈉組相比凋亡指數(shù)均明顯低(P＜0.05)；③脊髓損傷后96小時(shí)對(duì)照組、神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，七葉皂甙鈉組、甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-

11、生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉-生長(zhǎng)因子組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但與對(duì)照組、神經(jīng)生長(zhǎng)因子組、甘露醇組相比凋亡指數(shù)均明顯低(P＜0.05)；④脊髓損傷后7天對(duì)照組、甘露醇組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子組與對(duì)照組、甘露醇組相比凋亡指數(shù)均明顯低(P＜0.05)，七葉皂甙鈉組、甲強(qiáng)龍組、甲強(qiáng)龍-生長(zhǎng)因子組、七葉皂甙鈉-生長(zhǎng)因子組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)與其余各組相比凋亡指數(shù)均明顯低(P＜0.05)；⑤脊髓損傷后14天對(duì)照

12、組、甘露醇組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)外；其余5組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)但是與對(duì)照組、甘露醇組相比吸光度均明顯低(P＜0.05)。 結(jié)論一、單獨(dú)應(yīng)用甲強(qiáng)龍、七葉皂甙鈉、神經(jīng)生長(zhǎng)因子或者甲強(qiáng)龍-神經(jīng)生長(zhǎng)因子、七葉皂甙鈉-神經(jīng)生長(zhǎng)因子聯(lián)合使用治療脊髓損傷上都具有一定作用，可使脊髓損傷大鼠的行為學(xué)較對(duì)照組有明顯改善、病理學(xué)以及免疫組織學(xué)變化和細(xì)胞凋亡較對(duì)照組明顯輕； 二、甲強(qiáng)龍?jiān)诩顾钃p傷后盡早應(yīng)用較好，到傷后7天時(shí)