回乳抑增一號治療高泌乳素血癥與乳腺增生藥效學研究.pdf

1、目的：回乳抑增一號方(下簡稱“HRYZ”)是我院的臨床經(jīng)驗方,具有回乳消脹、軟堅散結(jié),化痰通絡,行氣活血之功效,主要用于治療婦女溢乳,乳癖結(jié)塊、乳房脹痛,療效確切,但原方劑藥理作用尚未得到驗證.本研究利用現(xiàn)代藥理學研究方法,通過觀察HRYZ對HPRL和乳腺增生兩種模型大鼠的治療作用,探討該藥治療兩病的作用機理,為其在臨床上的應用及進一步的制劑開發(fā)提供可靠的實驗依據(jù).
　　 方法：選用雌性未孕Wistar大鼠,背部皮下注射鹽酸甲氧

2、氯普胺注射液5天造成高泌乳素血癥模型。動物分為正常組、模型組、溴隱亭陽性藥組、回乳抑增一號高、中和低劑量組。造模成功后,陽性藥組給溴隱亭,劑量為0.393mg·kg-1·d-1;回乳抑增一號高、中、低劑量組分別按31.6g·kg-1·d-1、15.8 g·kg-1·d-1、7.9 g·kg-1·d-1劑量給予回乳抑增一號。正常組和模型組給等容量的蒸餾水,每日1次,每次2ml,連續(xù)20天。末次給藥24小時后,于次日采用摘眼球取血檢測。應用

3、ELISA法檢測血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)、促卵泡激素(FSH)、促黃體生成素(LH)的含量,觀察回乳抑增一號對HPRL大鼠的治療效果。
　　 選用雌性未孕Wistar大鼠,在大鼠后腿內(nèi)側(cè)肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg/d,連續(xù)25天,繼而肌注黃體酮注射液5mg/kg/d,連續(xù)5天,造成乳腺增生疾病模型;在疾病模型的基礎(chǔ)上,用鼠夾夾住一只大鼠的尾巴,使其與其他大鼠廝打,每次刺激30分鐘,每天刺

4、激1次,連續(xù)25天,造成乳腺增生伴有肝郁癥模型(簡稱病癥結(jié)合模型組)。動物分為正常組、疾病模型組、病癥結(jié)合模型組、三苯氧胺陽性藥組、乳癬散結(jié)陽性藥組、回乳抑增一號高、中和低劑量組。成功造模后,正常組、疾病模型組和病癥結(jié)合模型組大鼠灌胃蒸餾水(2mL/次),三苯氧胺陽性藥組大鼠按1.65mg/kg的劑量灌胃三苯氧胺溶液,乳癬散結(jié)陽性藥組大鼠按0.52g/kg的劑量灌胃乳癬散結(jié)溶液,回乳抑增一號高、中和低劑量組大鼠分別按33.1g/kg、1

5、6.55g/kg、8.28 g/kg的劑量灌胃回乳抑增一號湯劑,每天1次,連續(xù)30天.末次給藥24小時后,取血檢測用ELISA法檢測各組大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)、促卵泡激素(FSH)、促黃體生成素(LH)、促性腺激素釋放激素(GnRH)、5-羥色胺(5-HT)的含量;觀察各組大鼠乳腺組織病理學變化。從以上多角度多方面研究回乳抑增一號治療乳腺增生的作用機制。
　　 選用雌性未孕Wistar大鼠,隨機分

6、為正常組、HPRL模型組、乳腺增生模型組、混合模型(乳腺增生伴隨HPRL)組。制備10只HPRL大鼠模型,取其乳腺組織,制備成病理切片,顯微鏡下觀察是否出現(xiàn)乳腺增生以及增生程度;制備10只乳腺增生大鼠模型,用ELISA試劑盒檢測其血清中E2、P、PRL激素的含量。將10只大鼠先注射苯甲酸雌二醇和黃體酮,制備成乳腺增生模型后,再注射鹽酸甲氧氯普胺注射液5天,制備成混合模型大鼠。取其乳腺組織觀察乳腺增生情況,同時用ELISA試劑盒檢測其血清

7、中E2、P、PRL激素的含量,觀察兩病能否同時出現(xiàn)及其激素變化規(guī)律。
　　 將回乳抑增一號復方水煎溶液、麥芽、浙貝母、牡蠣、昆布、夏枯草、白芥子、山慈菇、玄參、丹參、郁金各單味藥水煎溶液,分別進高效液相色譜儀,建立HPLC色譜圖.研究復方及方中各單味藥水煎劑的差異,尋找方中主要藥味化學成分的變化規(guī)律。
　　 結(jié)果：
　　 1、與正常組比較,模型組大鼠血清PRL水平明顯升高(P＜0.05),說明大鼠高泌乳素血癥模型

8、制備成功,E2、P、FSH值明顯下降(P＜0.05),LH值變化不明顯.回乳抑增一號中劑量組和低劑量組大鼠血清PRL水平明顯下降,與疾病模型組有顯著差異(P＜0.05),且低劑量組接近正常組水平。回乳抑增一號中劑量組與模型組相比,E2、P、FSH水平顯著提高,均接近正常組水平,治療效果最好。
　　 2、乳腺增生疾病模型和病癥結(jié)合模型均制備成功,表現(xiàn)為血清E2、PRL、FSH、GnRH和5-HT顯著升高,P顯著降低;而且乳腺組織腺

9、泡和小葉增生嚴重,分泌物增多.經(jīng)灌胃高劑量回乳抑增一號后,乳腺增生大鼠血清E2、PRL、FSH、GnRH和5-HT含量均顯著降低(P＜0.05),P含量顯著升高(P＜0.05);乳腺病理切片顯示腺泡增生減輕,分泌物減少,增生程度大幅減輕,效果與陽性藥三苯氧胺類似,療效確切。
　　 3、10只HPRL大鼠的乳腺組織,發(fā)現(xiàn)腺泡輕度增生,存在少量分泌物,出現(xiàn)輕度乳腺增生(Ⅰ級或Ⅱ級)。10只乳腺增生大鼠的血清,發(fā)現(xiàn)其PRL均升高,與正

10、常組相比有顯著性差異?；旌夏Ｐ椭苽浜?發(fā)現(xiàn)PRL、P顯著升高,E2顯著降低,乳腺組織腺泡大量增生,分泌物增多,乳腺增生嚴重。說明混合模型(乳腺增生伴隨HPRL)大鼠成功制備,兩病均存在。25天后,再次檢測血清激素和乳腺組織,發(fā)現(xiàn)PRL,E2顯著升高,P顯著降低,乳腺組織腺泡大量增生,分泌物增多,乳腺增生嚴重。說明混合模型依舊存在。
　　 4、回乳抑增一號HPLC色譜圖中,第1、3號峰來源于麥芽;第2、4、5號峰主要來源于夏枯草;

11、第6、7號峰主要來源于白芥子;第9、10、12、13號峰主要來源于丹參,其中第13號峰為丹參酮ⅡA;第15號峰來自于玄參。但復方中第8號共有峰在夏枯草與白芥子單味藥材圖譜中均出現(xiàn),第11號共有峰在玄參、夏枯草和丹參單味藥材圖譜中均出現(xiàn);而第14號峰暫無歸屬。在相同藥材劑量條件下,來源于丹參的丹參酮ⅡA色譜峰在復方中顯著高于單味藥材;來源于白芥子的第6號峰、來源于夏枯草的第4、5號峰在復方中也顯著高于單味藥材;但由白芥子貢獻的第7號峰峰高