肢體缺血預(yù)處理腦保護(hù)作用及上調(diào)p38 MAPK和ERK的神經(jīng)-體液機(jī)制.pdf

1、目的:本課題的研究目的在于:探討股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)、自由基、腺苷在LIP腦保護(hù)作用及上調(diào)海馬CA1區(qū)p38 MAPK和ERK表達(dá)中的協(xié)同作用，以觀察神經(jīng)-體液通路在LIP腦保護(hù)中的作用，從而進(jìn)一步明確肢體缺血預(yù)處理發(fā)揮腦保護(hù)作用及上調(diào)p38 MAPK和ERK的機(jī)制，為提高神經(jīng)元缺血耐受性提供更充實(shí)有力的依據(jù)，為預(yù)防與治療缺血性腦血管病開辟更廣闊的天地。
　　方法:選用健康雄性Wistar大鼠(250～300g)464只，隨機(jī)分為2部

2、分:(1)股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及自由基在LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受中的協(xié)同作用;(2)股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及腺苷在LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受中的協(xié)同作用。
　　結(jié)果:
　　1.股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及自由基在LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受中的協(xié)同作用
　　1.1 LIP可部分逆轉(zhuǎn)大鼠全腦缺血-再灌注導(dǎo)致的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷、發(fā)揮腦保護(hù)作用;而橫斷兩側(cè)股神經(jīng)和/或坐骨神經(jīng)或股靜脈注射自由基清除劑DMTU均可部分阻斷LIP的上述保護(hù)作用，橫斷兩側(cè)股

3、神經(jīng)及坐骨神經(jīng)聯(lián)合股靜脈注射DMTU阻斷作用更加明顯，提示LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受有神經(jīng)和體液因子自由基的共同參與。
　　1.2 免疫組化、Western blot結(jié)果顯示，LIP上調(diào)腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)p-p38MAPK和p-ERK的表達(dá)、發(fā)揮腦保護(hù)作用有股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及體液因子自由基的共同參與。
　　2.股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及腺苷在LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受中的協(xié)同作用
　　2.1 股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及腺苷A1受體拮抗劑在

4、LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受中的協(xié)同作用
　　2.1.1 大鼠腦缺血再灌注引起的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的損傷可被LIP明顯減輕，分別或聯(lián)合橫斷兩側(cè)股神經(jīng)和坐骨神經(jīng)或股靜脈應(yīng)用腺苷A1受體拮抗劑DPCPX均可部分阻斷LIP的上述效應(yīng)，而神經(jīng)橫斷和股靜脈注射同時(shí)應(yīng)用時(shí)阻斷作用明顯增強(qiáng)，提示LIP誘導(dǎo)的腦缺血耐受有神經(jīng)和體液因子腺苷共同參與。
　　2.1.2 ①免疫組化結(jié)果顯示，全腦缺血sham組、BI組、LIP+BI組、FNT+LIP+B

5、I組、SNT+LIP+BI組及FNT+SNT+LIP+BI組海馬CA1區(qū)p-p38MAPK和p-ERK表達(dá)趨勢同1.2①。與LIP+BI組比較，大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元中p-p38 MAPK和p-ERK在DPCPX+LIP+BI組、DPCPX+FNT+LIP+BI組、DPCPX+SNT+LIP+BI組和DPCPX+FNT+SNT+LIP+BI組的表達(dá)量明顯減低，細(xì)胞胞核染色較淺，p-p38MAPK的積分光密度分別為30.35±0.86

6、、23.70±0.59、23.41±0.74和15.32±0.39，p-ERK的積分光密度分別為16.40±0.49、11.12±0.18、11.19±0.29、和9.45±0.30，p-p38 MAPK的陽性細(xì)胞總面積分別為9765.96±347.28、6668.90±354.16、6703.29±376.45和3528.92±395.46，p-ERK的陽性細(xì)胞總面積分別為4498.82±263.88、3165.54±233.04、3

7、138.54±93.17和2161.92±120.90，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，以DPCPX+FNT+SNT+LIP+BI組最顯著。②Western blot結(jié)果中p-p38MAPK和p-ERK在各組中表達(dá)趨勢均與免疫組化結(jié)果相符。以上免疫組化、Western blot結(jié)果表明LIP通過神經(jīng)途徑和體液因子腺苷上調(diào)了腦缺血海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和p-ERK表達(dá)。
　　2.2 股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)及腺苷在LIP誘導(dǎo)的腦缺

8、血耐受中的協(xié)同作用
　　2.2.1 免疫組化、Western blot結(jié)果進(jìn)一步表明神經(jīng)途徑和腺苷共同參與了LIP上調(diào)大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和p-ERK的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　(1)LIP前橫斷兩側(cè)股神經(jīng)和/或坐骨神經(jīng)和/或股靜脈注射自由基清除劑DMTU或腺苷A1受體拮抗劑DPCPX均可部分阻斷LIP的腦保護(hù)作用，股靜脈注射腺苷可以發(fā)揮類似LIP的腦保護(hù)作用。提示LIP通過股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)、體液因子自由