肢體缺血預處理腦保護作用及上調(diào)p38MAPKt ERK的體液機制.pdf

1、目的:腦缺血性疾病具有發(fā)病率、致殘率、死亡率高，知曉率、治療率、控制率低等特點，嚴重威脅著人類的生命健康。且隨著我國老齡化社會的到來，此類疾病的嚴峻形勢不容忽視。近年來，許多科研人員致力于調(diào)動機體內(nèi)源性保護機制以提高腦神經(jīng)細胞對缺血性損害的抵抗力的研究，使其在遭受嚴重的缺血打擊并恢復血液灌流后仍具有正常的生理功能，為此類疾病的防治提供新思路。
　　自1990年日本學者Kitagawa發(fā)現(xiàn)腦缺血預處理現(xiàn)象以來，大量研究證實了同一器官

2、缺血預處理所帶來的保護作用。盡管腦缺血預處理誘導的腦缺血耐受具有強大的內(nèi)源性保護作用，然而對中樞器官進行缺血預處理，很難作為一種腦缺血前的預防措施直接應用于臨床。隨著對缺血預處理研究的進一步深入，許多研究者發(fā)現(xiàn)并證實了遠隔器官缺血預處理的保護作用。遠隔器官缺血預處理是指預先對靶器官以外的組織或器官進行缺血預處理，使靶器官產(chǎn)生缺血耐受的現(xiàn)象。這一發(fā)現(xiàn)實現(xiàn)了采用非重要生命器官缺血預處理對抗重要生命器官的缺血再灌注損傷，具有更好的可操作性與安

3、全性。
　　我們近些年的研究證實，反復3次雙側股動脈夾閉和開放的肢體缺血預處理(limb ischemic preconditioning，LIP)可減輕隨后即刻發(fā)生的腦缺血再灌注引起的大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的延遲性死亡和凋亡、誘導腦缺血耐受。隨后，我們在進一步的研究中發(fā)現(xiàn)LIP可通過上調(diào)大鼠海馬CA1區(qū)p38 MAPK、ERK、HSP70以及Ngb等的表達，抑制凋亡通路，改變SOD活性等途徑，誘導大鼠腦缺血耐受。然而，缺血預

4、處理的肢體與遭受缺血打擊的大腦相隔較遠，由LIP啟動的內(nèi)源性保護信號如何作用于腦，其機制尚不完全清楚。2009年，加拿大學者Shimizu等在家兔離體心臟和心肌癥模型中發(fā)現(xiàn)，將LIP誘導的心肌缺血耐受的家兔血漿和血漿透析液給予單純心肌缺血的家兔，同樣可以保護受損的心肌，這說明LIP可通過體液途徑發(fā)揮遠隔器官或組織的保護作用。隨著研究的進一步深入，后來人們又發(fā)現(xiàn)了自由基、腺苷等體液因子參與了此過程:在脊髓的缺血再灌注損傷模型中，于LIP前

5、靜脈內(nèi)給予自由基清除劑DMTU能逆轉LIP的脊髓保護作用，提示LIP可通過自由基發(fā)揮保護作用;2014年，Montero等研究發(fā)現(xiàn)，在小腸缺血再灌注損傷模型中，靜脈給予腺苷可減輕由小腸缺血再灌注所繼發(fā)的心臟損害，提示腺苷發(fā)揮了遠隔器官的保護作用。那么，LIP能否通過體液因子腺苷及自由基誘導腦缺血耐受？同時這些體液因子是否能上調(diào)此過程中p38 MAPK和ERK的表達呢？
　　因此，本課題的研究目的在于:①自由基及腺苷在LIP誘導的大

6、鼠腦缺血耐受中的作用;②自由基及腺苷在LIP誘導的大鼠海馬CA1區(qū)p38 MAPK和ERK表達上調(diào)中的作用。通過對上述問題的研究，以期為LIP的腦保護作用提供充實的實驗依據(jù)，有助于更全面地認識LIP腦保護作用的機制。
　　方法與結果:
　　1、自由基及腺苷在LIP誘導的大鼠腦缺血耐受中的作用
　　1.1自由基清除劑DMTU對LIP誘導的大鼠腦缺血耐受的影響
　　動物分組:雄性Wistar大鼠80只，永久凝閉雙側椎

7、動脈后恢復兩天，隨機分為以下5組:①全腦缺血的sham組(n=10):只暴露雙側頸總動脈，不阻斷血流;②全腦缺血(brain ischemia，BI)組(n=10):夾閉雙側頸總動脈8 min后恢復再灌注;③LIP+BI組(n=10):夾閉雙側股動脈10 min、再灌注10 min，反復3次作為LIP后，即刻夾閉雙側頸總動脈8 min作為損傷性缺血，然后恢復再灌注;④DMTU+LIP+BI組(n=40):于LIP前1h股靜脈內(nèi)注射自由基

8、清除劑DMTU后，即刻給予8 min全腦缺血， DMTU進一步分為0 mg/kg、250 mg/kg、500 mg/kg和750 mg/kg4個亞組;⑤DMTU+sham組(n=10):股靜脈內(nèi)注射DMTU(500 mg/kg)，1h后暴露雙側頸總動脈。
　　實驗方法:①硫堇染色:以上各組（含亞組）大鼠分別取6只在末次手術后7d斷頭取腦，冠狀切取視交叉后1～4 mm腦片，常規(guī)組織切片，進行硫堇染色，觀察遲發(fā)性神經(jīng)元損傷程度。低倍鏡

9、下觀察硫堇染色的海馬組織形態(tài)，參照Kitagawa(1990)和Kato(1991)分級方法，對海馬CA1區(qū)確定組織學分級(histological grade，HG)，標準如下:0級:無神經(jīng)元死亡;Ⅰ級:散在神經(jīng)元死亡;Ⅱ級:成片神經(jīng)元死亡;Ⅲ級:幾乎全部神經(jīng)元死亡。高倍顯微鏡下計數(shù)雙側海馬CA1區(qū)每1 mm區(qū)段內(nèi)細胞膜完整、胞核飽滿、核仁清晰的錐體細胞數(shù)目，每張切片雙側海馬各計數(shù)3個區(qū)段，取平均數(shù)作為神經(jīng)元密度(neuronal d

10、ensity, ND)，作為判定遲發(fā)性神經(jīng)元損傷程度的依據(jù);②SOD、MDA測定:各組（含亞組）其余4只大鼠在末次手術后3天于右心室采集血液后，按照試劑盒使用說明測定血清中SOD活力及MDA的含量。
　　實驗結果:①硫堇染色結果顯示，全腦缺血的sham組、DMTU500+ sham組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞排列整齊、致密，層數(shù)為2～3層，細胞形態(tài)完整、邊界清晰，無細胞缺失，胞核飽滿、核仁深染、清晰，無明顯的延遲性神經(jīng)元死亡（del

11、ayed neuronal death，DND），HG為0級，ND值分別為219.11±12.45(cells/mm，下同)、216.00±9.45。BI組大鼠海馬CA1區(qū)出現(xiàn)明顯的DND，錐體細胞形態(tài)改變明顯，幾乎全部神經(jīng)元死亡或缺失，與全腦缺血的sham組相比，HG（Ⅲ級）明顯升高(P＜0.01)，ND（48.67±4.34）值明顯降低（P＜0.01）。在LIP+BI組、DMTU0+LIP+ BI組海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元未見明顯損傷

12、，僅個別細胞胞核固縮，細胞排列整齊，無明顯細胞缺失，HG為0～Ⅰ級，ND值分別為212.44±26.35、209.67±23.78。LIP+BI組與BI組相比，HG明顯降低(P＜0.01)、ND值明顯升高(P＜0.01)。DMTU250+LIP+BI組、DMTU500+LIP+BI組、DMTU750+LIP+BI組大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元均有明顯組織學損傷，細胞形態(tài)發(fā)生改變，成片死亡或缺失，HG為Ⅰ～Ⅱ級，ND值分別為153.44±2

13、7.20、121.33±18.37和123.78±28.75，與LIP+BI組相比，HG升高(P＜0.01)，ND值明顯降低(P＜0.01)。此外，DMTU500+LIP+BI組與DMTU750+LIP+BI組間無明顯統(tǒng)計學差異。上述結果表明:LIP明顯減輕了大鼠全腦缺血再灌注引起的海馬CA1區(qū)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡、發(fā)揮了腦保護作用;LIP前股靜脈內(nèi)注射自由基清除劑DMTU可部分阻斷LIP的腦保護作用，且DMTU的最佳劑量為500 mg/k

14、g，提示體液因子自由基部分參與了LIP誘導的腦缺血耐受。②血清SOD活力、MDA含量結果顯示:BI組大鼠血清SOD活力為161.73±7.86（U/ml，下同），MDA含量為13.41±1.22（nmol/ml，下同）。與BI組相比，LIP+BI組大鼠血清SOD活力（204.02±12.43）明顯增加(P＜0.01)，MDA含量（7.65±0.85）明顯下降(P＜0.01)。與LIP+BI組相比，DMTU500+LIP+BI組大鼠血清S

15、OD活力（182.30±11.33）明顯下降(P＜0.01)，MDA含量（11.08±1.55）明顯上升(P＜0.01)。上述結果表明，體液因子自由基可部分通過上調(diào)SOD活力、降低MDA含量參與LIP誘導的大鼠腦缺血耐受。
　　1.2腺苷A1受體拮抗劑DPCPX對LIP誘導的大鼠腦缺血耐受的影響
　　動物分組:雄性Wistar大鼠80只，永久凝閉雙側椎動脈后恢復兩天，隨機分為以下5組:①全腦缺血的sham組(n=10):只暴

16、露雙側頸總動脈，不阻斷血流;②BI組(n=10):夾閉雙側頸總動脈8 min后恢復再灌注;③LIP+BI組(n=10):夾閉雙側股動脈10 min、再灌注10 min，反復3次作為LIP后，即刻夾閉雙側頸總動脈8 min作為損傷性缺血，然后恢復再灌注;④DPCPX+LIP+BI組(n=40):于LIP前5 min股靜脈內(nèi)注射腺苷A1受體拮抗劑DPCPX，即刻給予8 min全腦缺血，DPCPX進一步分為0 nmol/kg、16 nmol/

17、kg、32 nmol/kg和48 nmol/kg4個亞組;⑤DPCPX+sham組(n=10):股靜脈內(nèi)注射腺苷A1受體拮抗劑DPCPX(32nmol/kg)，5 min后暴露雙側頸總動脈。
　　實驗方法同1.1
　　實驗結果:①硫(堇)染色結果顯示，全腦缺血的sham組、DPCPX32+ sham組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞無明顯的DND，HG為0級、ND值分別為221.89±10.08和213.22±12.77。BI組大鼠

18、海馬CA1區(qū)有明顯的組織學損傷，出現(xiàn)嚴重的DND，與全腦缺血的sham組相比，HG(Ⅲ級)明顯升高(P＜0.01)，ND值（46.56±6.45）明顯降低(P＜0.01)。LIP+BI組、DPCPX0+LIP+BI組海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)僅個別細胞胞核固縮，無明顯缺失，HG為0～I級，ND值分別為211.56±15.59、213.00±14.67。LIP+BI組與BI組相比，HG明顯降低(P＜0.01)、ND值明顯升高(P＜0.01)。D

19、PCPX16+LIP+BI組海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元形態(tài)發(fā)生改變，散在死亡或缺失，HG為Ⅰ～Ⅱ級，ND值為124.56±28.05，與LIP+BI組相比，HG升高（P＜0.01），ND值明顯降低(P＜0.01)。DPCPX32+LIP+ BI組與DPCPX48+LIP+BI組海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元損傷明顯，成片死亡或缺失，HG為Ⅱ～Ⅲ級，ND值分別為77.00±32.25、71.44±28.84，與LIP+BI組相比，HG升高(P＜0.0

20、1)，ND值明顯降低(P＜0.01)。上述結果表明:LIP明顯減輕了大鼠全腦缺血再灌注引起的海馬CA1區(qū)DND，發(fā)揮了腦保護作用;LIP前股靜脈內(nèi)注射腺苷A1受體拮抗劑DPCPX可部分阻斷LIP的腦保護作用，且DPCPX的最佳劑量為32nmol/kg，提示體液因子腺苷參與了LIP誘導的腦缺血耐受。②血清SOD活力、MDA含量結果顯示:與BI組相比，LIP+BI組大鼠血清SOD活力（204.02±12.43）明顯增加(P＜0.01)，MD

21、A含量（7.65±0.85）明顯下降(P＜0.01)。與LIP+BI組相比，DPCPX32+LIP+BI組大鼠血清SOD活力（175.07±11.18）明顯下降（P＜0.01），MDA含量(12.01±1.02)明顯上升(P＜0.01)。上述結果表明，體液因子腺苷可部分通過上調(diào)SOD活力、降低MDA含量參與LIP誘導的大鼠腦缺血耐受。
　　1.3腺苷(Ade)對大鼠腦缺血的影響
　　動物分組:雄性Wistar大鼠70只，永久

22、凝閉雙側椎動脈后恢復兩天，隨機分為以下4組:①全腦缺血的sham組(n=10):只暴露雙側頸總動脈，不阻斷血流;②BI組(n=10):夾閉雙側頸總動脈8 min后恢復再灌注;③Ade+BI組(n=40):于BI前10 min股靜脈內(nèi)注射腺苷，其余步驟同BI組，腺苷進一步分為0 nmol/kg、10 nmol/kg、20 nmol/kg和40nmol/kg4個亞組;④Ade+sham組(n=10):股靜脈內(nèi)注射腺苷(20nmol/kg)，

23、10 min后暴露雙側頸總動脈。
　　實驗方法同1.1
　　實驗結果:①硫堇染色結果顯示，全腦缺血的sham組、Ade20+sham組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞無明顯的DND。BI組、Ade0+BI組CA1區(qū)組織學損傷明顯，幾乎全部神經(jīng)元死亡或缺失，HG為Ⅲ級，ND值分別為46.89±7.01、45.89±4.89。BI組與全腦缺血的sham組相比，HG明顯升高（P＜0.01），ND值明顯降低（P＜0.01）。Ade10+BI

24、組海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元有較明顯組織學損傷，HG為Ⅰ～Ⅱ級，ND值為145.11±29.04，與BI組相比，HG降低(P＜0.01)、ND值升高(P＜0.01)。Ade20+BI組、Ade40+BI組CA1區(qū)錐體神經(jīng)元僅有散在死亡，HG分別為0～Ⅱ、0～Ⅰ級，ND值分別為183.44±30.84、193.44±10.80，與BI組相比，HG顯著降低(P＜0.01)、ND值顯著升高(P＜0.01)。綜上，腺苷能較好地模擬LIP的腦保護作用

25、，其最佳劑量為20 nmol/kg，進一步提示體液因子腺苷參與了腦缺血耐受的誘導。②血清SOD活力、MDA含量結果表明:BI組大鼠血清SOD活力為161.73±7.86，MDA含量為13.41±1.22。與BI組相比，Ade20+BI組大鼠血清SOD活力（190.14±7.41）明顯增加(P＜0.01)，MDA含量（8.24±0.84）有明顯下降(P＜0.01)。上述結果進一步表明，體液因子腺苷可通過上調(diào)血清SOD活力、降低MDA含量參

26、與大鼠腦缺血耐受的誘導。
　　2自由基及腺苷在LIP誘導的大鼠海馬CA1區(qū)p38 MAPK和ERK表達上調(diào)中的作用
　　2.1自由基清除劑DMTU對LIP誘導的大鼠海馬CA1區(qū)p38 MAPK和ERK表達的影響
　　動物分組同1.1
　　實驗方法:①免疫組織化學法:以上各組（含亞組）大鼠分別取5只在末次手術后12h斷頭取腦，冠狀切取視交叉后1～4 mm腦片，常規(guī)組織切片，用p-p38 MAPK或p-ERK抗體分別

27、標記p-p38 MAPK或p-ERK，DAB顯色后，應用顯微圖像分析系統(tǒng)測定陽性細胞顯色面積及積分光密度，相對定量分析p-p38 MAPK和p-ERK蛋白表達的變化;②Western blot法:各組（含亞組）其余5只大鼠在末次手術后12 h取海馬腦組織，按Western blot常規(guī)方法制備待測樣品，凝膠電泳、抗體孵育后，應用凝膠成像分析系統(tǒng)對電泳條帶進行分析處理，相對定量分析p-p38 MAPK、p-ERK蛋白的表達。
　　實

28、驗結果:①免疫組化結果顯示:全腦缺血的sham組、BI組和DMTU500+sham組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK與p-ERK陽性表達較少，陽性細胞胞核著色且較淺，呈棕黃色，p-p38 MAPK的積分光密度分別為12.23±1.52、12.42±1.81和11.95±1.30，p-ERK的積分光密度分別為4.60±0.19、4.75±0.23和4.65±0.20，p-p38 MAPK的陽性細胞總面積分別為5366.53±926.5

29、9(μm2，下同)、5783.77±874.26和5582.38±887.95，p-ERK的陽性細胞總面積分別為3395.34±291.14、3453.57±374.73和3610.90±210.03。LIP+BI組、DMTU0+LIP+BI組CA1區(qū)p-p38 MAPK和p-ERK的陽性表達明顯增多，胞核深染，呈深棕黃色，p-p38 MAPK的積分光密度分別為68.57±6.87和66.37±5.03，p-ERK的積分光密度分別為31

30、.49±3.66和30.62±2.90，p-p38 MAPK的陽性細胞總面積分別為19975.52±1718.97和18513.65±1591.89，p-ERK的陽性細胞總面積分別為15310.05±618.57和14944.25±545.41，LIP+BI組與BI組相比均有顯著性差異(P＜0.01)。DMTU250+LIP+BI組、DMTU500+LIP+BI組和 DMTU750+LIP+BI組海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK與p-E

31、RK陽性表達均有明顯的下降，胞核著色且較淺，p-p38 MAPK的積分光密度分別為48.19±4.50、36.32±3.03和35.29±3.18，p-ERK的積分光密度分別為22.60±2.23、13.27±2.01和13.48±2.18，p-p38 MAPK的陽性細胞總面積分別為12924.70±1231.43、9604.63±1077.03和9388.41±989.71，p-ERK的陽性細胞總面積分別為9562.06±355.64

32、、6550.33±343.35和6687.39±235.33，與LIP+BI組相比均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);②Western blot結果顯示，全腦缺血的sham組、BI組和DMTU500+sham組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38MAPK和p-ERK的表達量較低，p-p38 MAPK的IOD值與對應β-actin的IOD值的比值分別為0.24±0.04、0.27±0.04和0.27±0.03，p-ERK的IOD值與對應β-actin的

33、IOD值的比值分別為0.35±0.06、0.43±0.08和0.36±0.04。LIP+BI組和DMTU0+LIP+BI組海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和p-ERK的表達量明顯升高，p-p38 MAPK的IOD值與對應β-actin的IOD值的比值分別為0.67±0.08和0.68±0.08，p-ERK的IOD值與對應β-actin的IOD值的比值分別為0.83±0.07和0.84±0.07，LIP+BI組與BI組相比有顯著統(tǒng)計學差異

34、(P＜0.01)。DMTU250+LIP+BI組、DMTU500+LIP+BI組和DMTU750+LIP+BI組海馬CA1區(qū)p-p38MAPK和p-ERK的表達量均明顯下降，與LIP+BI組相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。上述免疫組化、Western blot結果表明，LIP部分通過自由基上調(diào)了腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和p-ERK的表達。
　　2.2腺苷A1受體拮抗劑DPCPX對LIP誘導的大鼠海馬CA1區(qū)p3

35、8 MAPK和ERK表達的影響
　　動物分組同1.2
　　實驗方法同2.1
　　實驗結果:①免疫組化結果顯示:全腦缺血的sham組、BI組和DPCPX32+sham組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38MAPK與p-ERK陽性表達較少，陽性細胞胞核著色且較淺，呈棕黃色，p-p38MAPK的積分光密度分別為12.23±1.52、12.42±1.81和12.96±1.09，p-ERK的積分光密度分別為4.60±0.19、4.75±0

36、.23和4.63±0.19，p-p38 MAPK的陽性細胞總面積分別為5366.53±926.59、5783.77±874.26和5850.75±722.59，p-ERK的陽性細胞總面積分別為3395.34±291.14、3453.57±374.73和3322.09±291.01。LIP+BI組、DPCPX0+LIP+BI組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK與p-ERK陽性表達明顯增多，胞核深染，呈深棕黃色，p-p38 MAPK的積分

37、光密度分別為68.57±6.87和65.67±5.69，p-ERK的積分光密度分別為31.49±3.66和30.88±2.43，p-p38 MAPK的陽性細胞總面積分別為19975.52±1718.97和18239.42±1594.06，p-ERK的陽性細胞總面積分別為15310.05±618.57和16071.61±689.89，LIP+BI組與BI組相比有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。DPCPX16+LIP+BI組、DPCPX32

38、+LIP+BI組、DPCPX48+LIP+BI組海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK與p-ERK陽性表達均有明顯的下降，胞核著色且較淺，p-p38 MAPK的積分光密度分別為38.74±4.02、28.05±2.71和27.40±2.20，p-ERK的積分光密度分別為23.49±1.84、16.24±1.32和16.88±1.43，p-p38 MAPK的陽性細胞總面積分別為12340.18±1056.76、8963.94±935.41和93

39、96.58±850.62，p-ERK的陽性細胞總面積分別為9417.67±345.75、7826.61±233.91和8013.11±252.23，與LIP+BI組相比均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);②Western blot結果中各組p-p38 MAPK與p-ERK表達趨勢與免疫組化結果一致。上述結果表明，LIP部分通過腺苷上調(diào)腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和p-ERK的表達。
　　2.3腺苷對腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)

40、p38 MAPK和ERK表達的影響
　　動物分組同1.3
　　實驗方法同2.1
　　實驗結果:①免疫組化結果顯示:全腦缺血的sham組、BI組、Ade0+BI組和Ade20+sham組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK與p-ERK陽性表達較少，陽性細胞胞核著色且較淺，呈棕黃色，p-p38 MAPK的積分光密度分別為12.23±1.52、12.42±1.81、13.02±1.18和14.54±1.34，p-ERK的積分

41、光密度分別為4.60±0.19、4.75±0.23、4.66±0.20和4.59±0.31，p-p38MAPK的陽性細胞總面積分別為5366.53±926.59、5783.77±874.26、5529.65±766.16和5272.40±742.64，p-ERK的陽性細胞總面積分別為3395.34±291.14、3453.57±374.73、3635.09±255.83和3486.83±310.10。Ade10+BI組、Ade20+BI

42、組和Ade40+BI組海馬CA1區(qū)p-p38MAPK與p-ERK陽性表達均有明顯增多，胞核深染，呈深棕黃色，p-p38MAPK積分光密度分別為23.09±1.46、41.61±3.22和39.57±5.02，p-ERK的積分光密度分別為12.61±1.67、25.60±2.06和24.54±1.59，p-p38 MAPK陽性細胞總面積分別為9078.42±909.58、14711.33±1226.75和14549.98±1129.92，

43、p-ERK的陽性細胞總面積分別為8551.07±368.26、13350.40±651.58和12869.38±734.89，與BI組相比均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);②Western blot結果顯示，全腦缺血的sham組、BI組、Ade0+BI組和Ade20+sham組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38和p-ERK的表達量較低。Ade10+BI組、Ade20+BI組和Ade40+BI組CA1區(qū)p-p38和p-ERK的表達量有較明顯升高，與

44、BI組相比均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。上述結果表明，腺苷可模擬LIP的作用，上調(diào)海馬CA1區(qū)p38 MAPK和ERK的表達。
　　結論:
　　(1) LIP前經(jīng)股靜脈給予自由基清除劑或腺苷A1受體拮抗劑可部分逆轉LIP的腦保護作用，經(jīng)股靜脈給予腺苷可部分模擬LIP的腦保護作用，提示體液因子自由基及腺苷參與了LIP的腦保護作用。
　　(2) LIP前經(jīng)股靜脈給予自由基清除劑或腺苷A1受體拮抗劑可部分阻斷LIP對腦缺血