P38αMAPK在大鼠卵泡中的表達及功能研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述:
　　第一部分:P38αMAPK在雌性大鼠卵泡發(fā)育中的表達
　　目的：P38αMAPK信號通路在雌性生殖系統(tǒng)中起著重要的作用，然而在大鼠卵泡中的表達和功能還不是很清楚，本研究通過探索P38αMAPK在大鼠卵泡發(fā)育過程中是否表達，從而探究P38αMAPK在卵泡發(fā)育中的功能。
　　方法：隨機選取成年雄性SD大鼠和成年雌性大鼠，按照1:2的比例交配，繁殖新生大鼠，分別收集2d、4d、8d、12

2、d、16d、20d、30d的新生雌性大鼠的卵巢。通過免疫組化檢測P38αMAPK和p-P38αMAPK在不同年齡段卵巢中的表達情況；通過western-blot檢測P38αMAPK和p-P38αMAPK在不同年齡段大鼠卵巢中表達變化。
　　結果：P38αMAPK在卵泡細胞和顆粒細胞中持續(xù)表達，在不同卵泡卵母細胞中， P38αMAPK表達相對穩(wěn)定，而p-P38αMAPK表達逐漸增強；在不同鼠齡的顆粒細胞中，P38αMAPK表達也相對

3、穩(wěn)定，而p-P38αMAPK表達呈現(xiàn)動態(tài)變化的趨勢，隨著卵泡的發(fā)育，在第12d、30d表達相對較少，而在第16d、20d表達相對較多；western-blot檢測發(fā)現(xiàn) P38αMAPK在卵巢中的表達相對穩(wěn)定，而p-P38αMAPK表達是先增加隨后減少的趨勢，在16d、20d表達相對較多。
　　結論：P38αMAPK在大鼠卵泡發(fā)育中存在表達，且表達存在一定的時間效應,對卵泡發(fā)育可能有重要作用。
　　第二部分:探索P38αMAP

4、K在卵母細胞中的定位與功能
　　目的：探究P38αMAPK在大鼠卵母細胞中的定位及功能。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠卵母細胞，通過免疫熒光的方式分別檢測P38αMAPK，p-MK2，p-P38αMAPK在大鼠卵母細胞減數(shù)分裂不同時間段的表達定位情況；通過western-blot檢測卵母細胞減數(shù)分裂不同時間段 p-P38αMAPK表達量變化；用P38αMAPK特異性抑制劑SB203580共培養(yǎng)卵母細胞，觀察卵母細胞生發(fā)泡破裂率和成

5、熟率；western-blot檢測 SB203580共培養(yǎng)卵母細胞3h和12h的p-P38αMAPK表達情況。
　　結果：發(fā)現(xiàn)P38αMAPK在大鼠卵母細胞GV期，分布于整個細胞包括細胞質和細胞核中，但主要集中于細胞核周圍；在大鼠卵母細胞MⅠ期，P38αMAPK在紡錘體區(qū)域分布相對較少。p-MK2在大鼠卵母細胞GV期定位細胞質中，主要集中于細胞核周圍；在MⅠ期p-MK2，主要集中在紡錘體和核周圍。p-P38αMAPK在大鼠卵母細胞

6、減數(shù)分裂GV期定位于細胞質，主要在細胞核周聚集，細胞核中未見表達；GVBD期，p-P38αMAPK均勻的分布于細胞質中；MⅠ期，p-P38αMAPK主要分布于紡錘體周圍；AⅠ-TⅠ期，p-P38αMAPK分布逐漸趨向兩極，圍繞著核分布；MⅡ期，p-P38αMAPK重新圍繞著紡錘體分布。Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)，p-P38αMAPK在GV期開始有表達，在MⅠ和MⅡ期表達量最高；SB203580共培養(yǎng)卵母細胞3h和12h發(fā)現(xiàn)：實驗組

7、培養(yǎng)3h，GVBD發(fā)生率為58.8±0.6％，而對照組GVBD發(fā)生率為82.5±1.6%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；實驗組培養(yǎng)12h，MⅡ發(fā)生率為40.1±3.1%，而對照組為73.3±3.7%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；western-blot檢測發(fā)現(xiàn)SB203580共培養(yǎng)3h和12h的大鼠卵母細胞實驗組p-P38αMAPK表達下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：P38αMAPK在大鼠卵母細胞