BMP2和TGFβ3雙基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在擴(kuò)增BMP2和TGFβ3基因，并構(gòu)建含有BMP2和TGF-β3的雙基因真核表達(dá)載體pIERS-BMP2-TGFβ3，為研究雙基因共轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞及其在體內(nèi)的表達(dá)情況和可能存在的協(xié)同效應(yīng)奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:首先，用PCR方法從質(zhì)粒pGEMT/BMP2中擴(kuò)增出BMP2基因全長，并將其連入雙基因真核表達(dá)載體pIRES，篩選出陽性重組質(zhì)粒pIRES-BMP2；其次，用RT-PCR的方法從人胚胎組織擴(kuò)增出TGFβ3基

2、因全長，將TGFβ3基因連入質(zhì)粒pIRES-BMP2；用酶切的方法篩選出陽性重組質(zhì)粒pIRES-BMP2-TGFβ3，并進(jìn)行測序鑒定。
　　 結(jié)果:成功的克隆出BMP2和TGFβ3基因，并將其連接到目的載體pIRES中，雙酶切和質(zhì)粒測序證實(shí)連接正確，且基因的開放閱讀框架正確，pIRES-BMP2-TGFβ3雙基因真核表達(dá)載體構(gòu)建成功。
　　 結(jié)論:利用PCR，DNA重組等分子生物學(xué)技術(shù)，成功構(gòu)建了雙基因真核表達(dá)載體pIR