新型肝靶向去甲斑螯素殼聚糖納米粒的吸收機(jī)理研究.pdf

1、目的：本文制備了兩種去甲基斑蝥素(Norcantharidin, NCTD)新型肝靶向納米粒：去甲基斑蝥素殼聚糖納米粒(Norcantharidin loaded chitosan nanoparticles，NCTD-CS-NPs)、去甲基斑蝥素N-乳糖酰殼聚糖納米粒(Norcantharidin-associated galactosylated chitosan nanoparticles，NCTD-GC-NPs)，采用多種腸道吸

2、收研究方法，旨在探明藥物及其殼聚糖納米粒制劑(NCTD-NPs)的腸道吸收動(dòng)力學(xué)特性，為其進(jìn)一步研究及新型靶向給藥系統(tǒng)(TDDS)的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：(1)通過(guò)離子誘導(dǎo)法制備N(xiāo)CTD-CS-NPs和NCTD-GC-NPs;動(dòng)態(tài)激光散射法測(cè)定平均粒徑與粒度分布；HPLC法測(cè)定兩種納米粒制劑的包封率和載藥量；透射電鏡觀察納米粒的表面形態(tài)；動(dòng)態(tài)透析法研究制劑的體外釋放特性。(2)采用大鼠在體循環(huán)灌流模型，考察了藥物及其納

3、米粒制劑的不同腸段吸收特性；研究了給藥濃度對(duì)藥物吸收的影響。(3)運(yùn)用大鼠離體外翻腸囊模型，研究了藥物及其納米制劑在不同腸段和不同給藥濃度下的腸道吸收特性；對(duì)離體腸的細(xì)胞活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)；研究了不同濃度的P-糖蛋白(P-gp)抑制劑對(duì)藥物腸道吸收的影響。(4)采用大鼠腸粘膜擴(kuò)散法，分別考察了各個(gè)腸段中制劑在吸收方向(粘膜側(cè)-漿膜側(cè)，Mucosa-Serosa，M-S)和分泌方向(S-M)的吸收情況；考察了不同給藥濃度對(duì)粘膜吸收的影響；比較

4、了五種吸收促進(jìn)劑對(duì)藥物吸收促進(jìn)作用的強(qiáng)弱。(5)建立體外Caco-2細(xì)胞模型，并進(jìn)行了驗(yàn)證性試驗(yàn)；考察了時(shí)間、溫度、濃度、外排作用對(duì)藥物攝取的影響；考察了給藥濃度、P-gp抑制劑、ATP能量抑制劑、內(nèi)吞抑制劑和細(xì)胞旁路轉(zhuǎn)運(yùn)促進(jìn)劑對(duì)藥物細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　 結(jié)果：(1)NCTD-CS-NPs和NCTD-GC-NPs的平均粒徑分別為：(131±11)，(119±9)nm；包封率分別為：(45.12±0.33)，（57.92±0.4

5、0）％；載藥量分別為：（7.3±0.13），(10.38±0.06)%;納米粒子均呈規(guī)則的圓球形；制劑體外釋放行為符合Weibull方程，相比于原料藥而言，納米粒更有利于藥物的釋放。(2)在體腸吸收結(jié)果顯示：藥物吸收速率常數(shù)（Ka）：十二指腸＞空腸＞回腸＞結(jié)腸；藥物濃度對(duì)腸道吸收無(wú)影響，藥物吸收無(wú)劑量依賴(lài)性；NCTD-NPs相對(duì)于藥物水溶液而言，Ka顯著提高，t1/2a明顯縮短，提示NCTD-NPs有利于藥物的胃腸道吸收。(3)離體外翻

6、腸試驗(yàn)結(jié)果與在體趨勢(shì)基本一致；相比于NCTD-CS-NPs，NCTD-GC-NPs更有利于藥物的吸收；P-gp抑制劑能顯著促進(jìn)藥物的吸收，提示藥物是P-gp的作用底物。(4)粘膜擴(kuò)散試驗(yàn)中：十二指腸段和空腸段，藥物的表觀滲透系數(shù)(Papp)在M-S與S-M之間無(wú)顯著差異，表明藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)可能是以依靠濃度差的被動(dòng)擴(kuò)散為主；空腸段和結(jié)腸段有顯著差異，表明在此區(qū)域存在一些特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)體，引起了藥物在不同方向轉(zhuǎn)運(yùn)的差異；各吸收促進(jìn)劑跨粘膜通透作用強(qiáng)

7、弱順序?yàn)椋旱头肿恿繗ぞ厶?CS-8000)＞高分子量殼聚糖(CS-30000)＞泊洛沙姆(Poloxamer)＞十二烷基磺酸鈉(SDS)＞去氧膽酸鈉(SDCh)。(5)Caco-2細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果顯示：30min內(nèi)細(xì)胞對(duì)藥物的攝取隨時(shí)間正相關(guān)；不同給藥濃度時(shí)攝取量無(wú)顯著差異；4℃時(shí)細(xì)胞對(duì)藥物的攝取量最大；促藥物轉(zhuǎn)運(yùn)作用：P-gp抑制劑(CyA)＞細(xì)胞旁路轉(zhuǎn)運(yùn)促進(jìn)劑(SDCh)＞能量生成抑制劑(NaN3)＞內(nèi)吞抑制劑(Oxophenylars