14--3--3sigma在肝內(nèi)膽管細胞癌中作用及其機制的研究.pdf

1、背景:
　　肝內(nèi)膽管細胞癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）是僅次于肝細胞癌的第二種最常見的原發(fā)性肝癌。目前全球范圍內(nèi)，肝內(nèi)膽管細胞癌近年來的發(fā)病率和死亡率在逐年上升。雖然近幾十年來肝臟腫瘤切除、藥物治療及肝臟移植等治療手段取得諸多進展，但是由于肝內(nèi)膽管細胞癌生長迅速，具有較高侵襲轉(zhuǎn)移能力，肝內(nèi)膽管細胞癌患者的長期預(yù)后仍然不理想。目前，即使是行根治性切除術(shù)后的ICC患者，其5年生存率仍只有2

2、0％～35％。所以，為了提高肝內(nèi)膽管細胞癌的早期診斷率從而讓更多的患者得以接受早期的外科手術(shù)治療，我們需要尋找敏感的肝內(nèi)膽管細胞癌的分子標(biāo)記物并且探究其機制。
　　目的:
　　14-3-3sigma蛋白在細胞周期調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞分化等多個過程中發(fā)揮著重要的作用。在肝內(nèi)膽管細胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中，14-3-3sigma的作用機制尚不清楚。本研究探討了肝內(nèi)膽管細胞癌患者的14-3-3sigma的表達與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

3、。此外，本研究在肝內(nèi)膽管細胞癌細胞系HCCC-9810和RBE中探究14-3-3sigma的生物學(xué)功能。
　　方法:
　　(1)提取28例ICC患者腫瘤組織及配對癌旁組織的冰凍標(biāo)本的mRNA，并收集他們的腫瘤及癌旁組織石蠟標(biāo)本，利用實時熒光定量PCR、免疫組化等技術(shù)驗證14-3-3sigma在ICC腫瘤組織以及癌旁組織的表達情況。此外，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對100例肝內(nèi)膽管細胞癌患者腫瘤組織和24例正常人肝組織的組織芯片進行

4、了分析。
　　(2)根據(jù)免疫組化結(jié)果，探究14-3-3sigma與肝內(nèi)膽管細胞癌病人臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。
　　(3)在肝內(nèi)膽管細胞癌細胞系中，通過轉(zhuǎn)染14-3-3sigma小干擾RNA的方式干擾14-3-3sigma，通過細胞層面的實驗，如劃痕實驗、Transwell實驗等，探索14-3-3sigma在肝內(nèi)膽管細胞癌細胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移的過程中所發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果:
　　14-3-3sigma在

5、肝內(nèi)膽管細胞癌組織中呈高表達。在肝內(nèi)膽管細胞癌患者中14-3-3sigma的表達越高，預(yù)后越差。在肝內(nèi)膽管細胞癌細胞系中，敲低14-3-3sigma可以減少腫瘤細胞的遷移、侵襲和失巢凋亡抵抗能力。此外，敲低14-3-3sigma后，腫瘤細胞中侵襲相關(guān)蛋白MMP2和MMP9表達的顯著減少。
　　結(jié)論:
　　我們的研究結(jié)果揭示了14-3-3sigma的預(yù)后價值以及它在肝內(nèi)膽管細胞癌轉(zhuǎn)移過程中的作用和機制。14-3-3sigma有