未分化型甲狀腺癌CRABP--Ⅱ和FABP5的表達(dá)失衡及其與維甲酸耐藥性相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的：
　　甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤，在與內(nèi)分泌有關(guān)的癌癥死亡患者中占絕大多數(shù)。大多數(shù)甲狀腺癌（乳頭狀和濾泡型）來自具有良好分化表型的濾泡性上皮，因此甲狀腺切除術(shù)具有良好的預(yù)后。然而，未分化型甲狀腺癌(Anaplastic thyroid cancer，ATC)盡管發(fā)病率低（約占總甲狀腺癌病例的2％），但其以很強的侵襲性迅速增長，導(dǎo)致ATC患者癌癥轉(zhuǎn)移不久就發(fā)生死亡。為了防止腫瘤復(fù)發(fā)，國內(nèi)外眾多研究者已經(jīng)采用了術(shù)后放

2、療、化療或其組合療法進(jìn)行腫瘤治療。維甲酸(Retinoic acid，RA)具有很強的促分化能力，目前在臨床上常被用作誘導(dǎo)分化的藥物，用于增強ATC患者的放療敏感性。但根據(jù)臨床數(shù)據(jù)顯示，該治療方案的結(jié)果不完全相同?；赗A的再分化治療已經(jīng)在臨床上應(yīng)用，因此需要迫切謹(jǐn)慎地評估RA在ATC治療中的適用性。
　　RA已被用于通過促進(jìn)放射性碘吸收的方式來克服甲狀腺癌的放射性碘抗性。然而，如上所述，治療后果是完全不同的。RA信號傳導(dǎo)可以通過

3、兩種經(jīng)典途徑，分別由CRABP-Ⅱ作為癌抑制和FABP5作為促癌途徑轉(zhuǎn)導(dǎo)。然而，目前還沒有關(guān)于這兩個RA相關(guān)因子在未分化型甲狀腺癌體內(nèi)外表達(dá)模式的研究報道。
　　因此，本研究旨在闡明導(dǎo)致ATC細(xì)胞對RA治療差異反應(yīng)的潛在原因。通過組織微陣列的免疫組織化學(xué)染色對甲狀腺癌及正常甲狀腺組織中的CRABP-Ⅱ和FABP5表達(dá)水平進(jìn)行分析，并通過多種實驗方法闡明其與三種ATC細(xì)胞的維甲酸耐藥性的關(guān)系。
　　材料與方法：
　　本研

4、究所用的人未分化型甲狀腺癌細(xì)胞系THJ-11T、THJ-16T和THJ-21T由大連醫(yī)科大學(xué)腫瘤干細(xì)胞研究院劉強教授提供。286例人甲狀腺癌組織標(biāo)本由大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床病理科和華南理工大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗科友情提供，僅用于組織芯片的構(gòu)建，不影響病理診斷。本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、MTT檢測、HE染色、IHC檢測、ICC檢測、IF檢測、RT-PCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)和石蠟組織微陣列等實驗方法，研究了下述內(nèi)容：1）通過對

5、不同ATC細(xì)胞的HE染色和MTT檢測技術(shù)分析其RA敏感性差異;2）采用ICC、IF以及Western Blot觀察三個細(xì)胞系中CRABP-Ⅱ和FABP5的表達(dá)情況，觀察維甲酸經(jīng)典信號通路組分CRABP-Ⅱ和FABP5在三種ATC細(xì)胞系中的表達(dá)情況;3)RA對CRABP-Ⅱ和FABP5轉(zhuǎn)錄水平的影響通過RT-PCR檢測;4）去甲基化劑和FABP5抑制劑與RA聯(lián)合用藥后，通過HE染色、MTT檢測法和鏡下觀察三個細(xì)胞系RA敏感性的變化，并通過

6、ICC檢測三個細(xì)胞系加藥前后CRABP-Ⅱ和FABP5的變化情況;5）通過石蠟組織微陣列的IHC檢測技術(shù)對人甲狀腺癌組織中CRABP-Ⅱ和FABP5的表達(dá)情況進(jìn)行觀察。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色顯示，正常培養(yǎng)的三個ATC細(xì)胞系經(jīng)RA處理后沒有發(fā)現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)變化。MTT檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA處理組的OD值高于N組和DMSO對照組。RA處理組與N組相比，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，但此差異幅度較小。
　　2.ICC和

7、IF顯示在三個細(xì)胞系中CRABP-Ⅱ表達(dá)水平均非常低，而FABP5水平明顯很高。RT-PCR和Western Blot結(jié)果與上述ICC和IF結(jié)果相符合。
　　3.三個ATC細(xì)胞系用GEM或GEM/RA聯(lián)合處理后，MTT檢測結(jié)果顯示，GEM和GEM/RA聯(lián)合處理組的細(xì)胞活性與正常培養(yǎng)細(xì)胞相比有明顯降低，GEM和GEM/RA聯(lián)合處理組之間的抑制率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4.在RA處理之前、與RA同時處理或獨立使用

8、FABP5的抑制劑作用于ATC細(xì)胞。MTT檢測結(jié)果顯示，其未能逆轉(zhuǎn)ATC細(xì)胞的RA耐藥性，ICC結(jié)果顯示其對FABP5的表達(dá)沒有抑制作用。
　　5.將286例人甲狀腺組織標(biāo)本通過其各自的形態(tài)學(xué)特征分為N、A、DTC和ATC4種病理亞型。使用組織微陣列IHC染色分析四種甲狀腺組織中的CRABP-Ⅱ和FABP5表達(dá)模式。
　　結(jié)果：顯示，不僅四種甲狀腺組織中CRABP-Ⅱ和FABP5表達(dá)模式高度變化，而且每個病理亞型中的個體情況

9、也有高度不同。
　　結(jié)論：
　　1.三種ATC細(xì)胞系沒有表現(xiàn)出明顯的RA敏感性，有促進(jìn)細(xì)胞增殖的趨勢。
　　2.RA處理能夠改變ATC細(xì)胞系的CRABP-Ⅱ和FABP5的表達(dá)模式，CRABP-Ⅱ低表達(dá)和FABP5高表達(dá)的狀態(tài)可能是揭示ATC細(xì)胞RA耐藥性的原因之一。
　　3.去甲基化劑GEM及其與RA的聯(lián)合用藥處理可顯著增加三種ATC細(xì)胞的RA敏感性，顯著抑制細(xì)胞增殖，并能上調(diào)CRABP-Ⅱ的表達(dá)。
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