AP-2α在動脈粥樣硬化和HeLa細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、第一部分轉(zhuǎn)錄因子AP-2α通過直接調(diào)節(jié)CD36參與動脈粥樣硬化 目的：轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-2α(AP-2α)在發(fā)育、分化和腫瘤過程中調(diào)節(jié)細(xì)胞型別的特異性基因的表達(dá)，但迄今為止，還未見AP-2α在動脈粥樣硬化中發(fā)揮作用的相關(guān)報(bào)道。目前的研究在于探討AP-2α通過直接調(diào)節(jié)CD36基因在動脈粥樣硬化的泡沫細(xì)胞形成中發(fā)揮的潛在作用。 方法：本研究應(yīng)用免疫組化和雙免疫熒光染色檢測AP-2α在apoE-/-小鼠和人動脈粥樣硬化病變的表

2、達(dá)；相對定量PCR、westernblot和免疫熒光染色檢測AP-2α對大鼠血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)CD36的影響；油紅O染色和高效液相色譜分析法測量大鼠血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積；螢光素酶分析試驗(yàn)、電泳遷移率變動分析試驗(yàn)和染色質(zhì)免疫沉淀法用于證明AP-2α對CD36基因啟動子的直接調(diào)節(jié)。 結(jié)果：AP-2α主要在apoE-/-小鼠和人動脈粥樣硬化病變的泡沫細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)。AP-2α上調(diào)大鼠血管平滑肌細(xì)胞CD36基因的mRNA和蛋白表達(dá)并

3、促進(jìn)大鼠血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積。AP-2α過表達(dá)能增強(qiáng)CD36基因啟動子活性，在CD36基因啟動子區(qū)域存在兩個AP-2結(jié)合位點(diǎn)，突變這兩個結(jié)合位點(diǎn)能削弱AP-2α對CD36基因啟動子活性的增強(qiáng)效應(yīng)。 結(jié)論：AP-2α通過直接調(diào)控CD36基因的表達(dá)來增加細(xì)胞對脂質(zhì)的攝取，從而在動脈粥樣硬化的形成中發(fā)揮了作用。 第二部分轉(zhuǎn)錄因子AP．2a參與多沙唑嗪誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡 目的：研究α1-腎上腺素受體拮抗劑多沙唑

4、嗪對HeLa細(xì)胞凋亡的影響以及轉(zhuǎn)錄因子AP-2α在多沙唑嗪誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡中發(fā)揮的作用。 方法：不同濃度的多沙唑嗪處理HeLa細(xì)胞16 h，通過DNA片斷形成分析、Hoechst 33258染色和流式分析檢測多沙唑嗪對HeLa細(xì)胞凋亡的影響；以相對定量PCR和Westem blot分析檢測AP-2α和caspase-3的表達(dá)。以AP-2α過表達(dá)質(zhì)?；蚍戳xAP-2α寡核苷酸分別轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后，通過流式檢測凋亡效應(yīng)；相對定

5、量PCR和Western blot分析檢測AP-2α和caspase-3的表達(dá)；比色法檢測caspase-3的酶活性。 結(jié)果：多沙唑嗪以劑量依賴性方式增加HeLa細(xì)胞的凋亡率和總細(xì)胞死亡率，并以劑量依賴性方式上調(diào)AP-2α和caspase-3的表達(dá)，caspase-3的活性也呈劑量依賴性方式增長。AP-2α的過表達(dá)導(dǎo)致多沙唑嗪誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞的凋亡率和總細(xì)胞死亡率增加，而反義AP-2α卻導(dǎo)致多沙唑嗪誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞的凋亡率和