兩個(gè)編碼C2H2型鋅指蛋白新基因的克隆、表達(dá)及初步功能分析.pdf_第1頁
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1、鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合模體(motif)中非常重要的一種,在許多轉(zhuǎn)錄因子中含有鋅指DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域.人紅白血病(Humanerythroleukemiacellline,HEL)細(xì)胞系在不同的誘導(dǎo)劑(Hemin與PMA)的作用下可以分別向紅系和巨噬細(xì)胞兩個(gè)方向分化,這種分化本質(zhì)上是依靠基因的特定表達(dá)實(shí)現(xiàn)的,其中就有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白可能在發(fā)揮重要作用.為研究造血細(xì)胞分化,特別是紅系分化過程可能涉及的新基因,該文先分別用H

2、emin和PMA誘導(dǎo)HEL細(xì)胞分化,提取RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,再根據(jù)鋅指結(jié)構(gòu)域部分氨基酸的保守序列,設(shè)計(jì)出簡(jiǎn)并PCR擴(kuò)增引物,對(duì)其cDNA進(jìn)行擴(kuò)增,獲得22個(gè)編碼鋅指細(xì)胞的EST.經(jīng)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中比較后,確定其中5個(gè)為已知蛋白編碼基因EST的序列,17個(gè)為新的鋅指蛋白編碼基因EST,在GenBank注冊(cè)(登錄號(hào)為:BE240813~BE240828).選擇兩個(gè)新EST篩選人骨髓細(xì)胞cDNA文庫(kù),獲得兩個(gè)新的鋅指蛋白編碼基因的

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