慢性丙型肝炎抗病毒治療應(yīng)答相關(guān)因素的研究.pdf

1、目的:應(yīng)用分子生物學(xué)和細(xì)胞學(xué)技術(shù),通過分析正常人群內(nèi)源性Ⅰ型及Ⅲ型干擾素(IFN)表達(dá)譜、比較IFN聯(lián)合利巴韋林治療不同應(yīng)答的慢性丙型肝炎患者IFN表達(dá)譜差異、研究白介素28B(即IFN-λ3)相關(guān)SNP位點(diǎn)(rs12979860)在中國漢族人群中的分布及其與慢性丙型肝炎治療應(yīng)答相關(guān)性,從宿主和病毒二個方面探討慢性丙型肝炎抗病毒治療應(yīng)答相關(guān)因素及其可能機(jī)制。
　　 方法：第一部分的研究中納入35例健康志愿者,抽取新鮮全血中的外周

2、血淋巴細(xì)胞(PBMCs),以不同的Toll樣受體(TLR3,7/8,9)配體、帶狀皰疹病毒-l(HSV-1)和豬水泡狀病毒(VSV)刺激,以Realtime-PCR的方法檢測IFN亞型的表達(dá)。第二部分對32例完成聯(lián)合抗病毒治療的慢性丙肝患者,以不同的Toll樣配體(TLR3是2小時和6小時,TLR7/8是2小時,TLR9是6小時)和病毒(HSV-1和VSV均為16小時)刺激,檢測IFN亞型的表達(dá)量。第三部分一共入選了259例慢性丙型肝炎

3、病毒(HCV)感染者,抽取基因組DNA,PCR擴(kuò)增,測序分析rs12979860位點(diǎn)的基因型分布及其與抗病毒療效之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：正常人PBMC在不同的配體作用下IFN表達(dá)的時間高峰是不同,TLR7/8和TLR9刺激分別在2小時和6小時達(dá)高峰,HSV-1和VSV感染后16小時達(dá)高峰,TLR3刺激后有2個表達(dá)峰,2小時和6小時。TLR3激活后主要誘導(dǎo)IFN-β和IFN-λs大量表達(dá),TLR7/8、9、HSV-1和VSV可以

4、誘導(dǎo)所有IFN亞型表達(dá)。慢性丙肝患者的研究中發(fā)現(xiàn),抗病毒治療無應(yīng)答患者基線IFN(-α1,-α2,-α4,-α5,-α6,-α8,-α14,-α16,-α17,-β,-ω和λ2/3)表達(dá)增高。應(yīng)答組的IFN-α2和α17誘導(dǎo)能力高于健康對照組(TLR7/8,9)和無應(yīng)答組(TLR3,9)。在259例慢性HCV感染者IL28B相關(guān)的SNP位點(diǎn)rs12979860的分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)中國漢族人群中CC型為主(87.6％),而CC型的患者有較非CC

5、型更高的抗病毒應(yīng)答率(77.22％vs18.18％)。rs12979860基因型(CC/N-CC)對治療結(jié)果的影響要強(qiáng)于性別、年齡、HCV基因型及治療前基線病毒載量因素,ETR(P=0.0003),SVR(P=0.0012)。
　　 結(jié)論：慢性丙肝患者抗病毒治療應(yīng)答者外周血PBMC基礎(chǔ)IFN亞型表達(dá)量及誘導(dǎo)后亞型譜與無應(yīng)答者不同,應(yīng)答組顯示了更強(qiáng)的IFN誘導(dǎo)能力,無應(yīng)答組IFN基線水平表達(dá)的上升可能提示患者IFN應(yīng)答能力不足。I