人食管下括約肌的套索纖維和鉤狀纖維與食管環(huán)形肌、胃底環(huán)形肌的G蛋白表達規(guī)律.pdf

1、目的:人食管下括約肌(LES)是位于食管胃連接部特殊增厚的環(huán)形肌,其寬度約2-3cm。Liebermann-Meffert等首次提出人LES由位于胃小彎側(cè)呈半環(huán)形的鉤狀纖維(clasp fibres)和位于大彎側(cè)呈斜行分布的套索纖維(slingfibres)共同構(gòu)成,這兩束肌纖維與膈腳一起在食管胃結(jié)合部形成高壓帶,維持LES的關(guān)閉狀態(tài),使LES形成一種類似單向閥門的結(jié)構(gòu)。正常狀態(tài)下,由于LES的持續(xù)性收縮使胃內(nèi)容物不能反流入食管,另一方

2、面,由于LES的適時舒張允許了食物繼續(xù)下行入胃,或嘔吐和打嗝,使胃內(nèi)的液體或氣體反流如食管并經(jīng)口腔排出。LES的收縮和舒張功能調(diào)節(jié)機制非常復(fù)雜,包括了神經(jīng)系統(tǒng)、體液因素及自身肌源性等多種因素。G蛋白是細胞跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的重要組成部分,絕大多數(shù)肽類激素都是通過G蛋白傳導(dǎo)通路發(fā)揮作用的。在神經(jīng)遞質(zhì)物質(zhì)中,除了幾種氨基酸遞質(zhì)外,其余的神經(jīng)遞質(zhì)物質(zhì),都主要是以在突觸后細胞中產(chǎn)生第二信使類物質(zhì)來完成跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的。有些被激活的G蛋白也可以直接調(diào)

3、控一些通道的功能狀態(tài),改變膜的反應(yīng)。不同的外界信號通過膜受體在膜內(nèi)生成第二信使來進行跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的,都需要通過結(jié)構(gòu)類似的各種G蛋白的介導(dǎo)。胃動素和胃泌素激活大鼠胃竇平滑肌細胞膜的Gi-3蛋白,繼而引起平滑肌細胞的收縮。促胰液素引起的大鼠胃平滑肌細胞的舒張由Gs蛋白介導(dǎo)。但目前國內(nèi)外對人LES受體類型及其分型以及調(diào)節(jié)機制的研究,主要局限于膽堿能受體,對于G蛋白的研究則相對甚少?，F(xiàn)有的對人食管下括約肌(LES)的研究也主要是針對動物(大鼠等

4、),與人有著種屬,生理學(xué)的差異,對于人LES的G蛋白的表達規(guī)律及調(diào)節(jié)機制的相關(guān)研究則未見報告。本實驗采用蛋白印跡法(Western-blot)研究人LES的G蛋白的Gi-3、Go、Gq11、Gs亞型在套索纖維、鉤狀纖維、食管環(huán)行肌和胃底環(huán)行肌中的表達規(guī)律,為進一步研究人LES調(diào)節(jié)機制奠定基礎(chǔ),為食管運動功能障礙性疾病的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1選取2008年12月到2009年10月在我院因高位食管中段

5、癌行食管大部切除術(shù)患者30例。手術(shù)室采集新鮮食管胃連接部手術(shù)標本,銳性剝?nèi)ノ纲S門部及食管下段的粘膜層及粘膜下層后,制備套索纖維(S)、鉤狀纖維(C)、食管體部環(huán)行肌(E)和胃底環(huán)行肌(G)的肌條;
　　 2按照100μl TBS/10mg標本的比例加入TBS,4℃條件下用組織勻漿器加入TBS液勻漿,勻漿液(4℃,1000×g)離心10分鐘。棄上清后,以美國PIERCE公司的膜蛋白提取試劑盒制備膜受體蛋白,BCA法定量,調(diào)整蛋白至

6、相同濃度后,應(yīng)用電泳儀電泳,分離出與4種G蛋白亞型的分子量大小相應(yīng)的蛋白后轉(zhuǎn)膜,最后應(yīng)用G蛋白亞型抗體行Western blot檢測蛋白的表達,并分析IOD值。
　　 結(jié)果:
　　 Western blot四種G蛋白亞型有其相應(yīng)蛋白條帶的表達,分別是Gq/11、Gi-3、Go、Gs,分子量分別為41kDa、45kDa、40kDa、48kDa。相同肌條不同亞型蛋白表達的IOD值在clasp fibers(C)中兩兩比較,G

7、i-3較Go、Gq11、Gs的表達少。相同亞型在各肌條間沒有蛋白表達的差異。
　　 結(jié)論:
　　 1.四種G蛋白亞型在鉤狀纖維(C)、套索纖維(S)、食管環(huán)形肌(E)、胃底環(huán)形肌(G)的肌條中均有表達。
　　 2.每一種肌束中的四種亞型的表達水平有差異。在鉤狀纖維(C)中Gi-3較Go、Gq11、Gs的表達少。在套索纖維(S)、食管環(huán)形肌(E)、胃底環(huán)形肌(G)中四種亞型的表達量無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 3.