人食管胃連接部和食管下括約肌解剖、組織學以及神經(jīng)遞質(zhì)受體表達的研究.pdf

1、由于人食管下括約肌(LES)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能的復雜性，LES的調(diào)節(jié)機制一直是困擾學術(shù)界的難題。 本實驗究采用人的食管胃連接部和LES肌束為實驗對象，應用內(nèi)窺鏡技術(shù)、電鏡技術(shù)、免疫組織化學技術(shù)、分子生物學技術(shù)等，除了對食管胃連接部解剖學和組織學進行研究外，重點對LES兩束鉤狀纖維和套索纖維的神經(jīng)遞質(zhì)受體分布和活性的差異進行初步研究，從而為LES功能研究、胃食管反流病和食管功能障礙性疾病的治療打下基礎。 本研究內(nèi)容和結(jié)果如

2、下：第一部分食管胃連接部和食管下括約肌的解剖學、組織學研究目的：研究食管胃連接部和食管下括約肌的解剖學、組織學特點，為食管下括約肌的抗返流機制提供形態(tài)學基礎。 方法：1對30例正常食管胃連接部進行胃鏡觀察，同時胃鏡觀察返流性食管炎、食管裂孔疝患者各5例。 2在10具尸體上，對食管胃連接部進行解剖學觀察，觀察食管腹段長度、食管胃粘膜線(Z線)的位置和形態(tài)、食管和胃底的夾角(His角)、膈食管裂孔的解剖特點。 3在手

3、術(shù)標本上觀測各段食管肌層的厚度差異以及食管下括約肌纖維形態(tài)特征。 4顯微鏡下觀察Z線上下食管粘膜和胃粘膜的上皮類型、食管下括約肌的細胞形狀、細胞排列狀況、胞漿是否豐富、細胞核的形狀和染色狀況；電鏡下觀察LES細胞的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：1胃鏡下觀測結(jié)果1.1正常食管胃連接部：30例胃鏡觀測顯示食管胃粘膜線呈齒狀或環(huán)狀，粘膜界限清楚，其中呈齒狀的21例，呈環(huán)狀的9例。A環(huán)位于食管下端距賁門口約2cm處，它收縮頻繁，銳利而有力；

4、膈壺腹(ampulla)是A環(huán)和膈裂孔之間一膨大部分，長約1.5～2cm，形態(tài)變化很大。 2尸體解剖的觀測結(jié)果2.1食管胃粘膜線兩側(cè)粘膜顏色對比明顯，食管粘膜呈灰白色，胃粘膜呈暗紅色，粘膜線上方的食管粘膜有數(shù)條縱性皺襞，下方的胃粘膜皺襞里放射狀或橫行排列。食管胃粘膜線多位于膈與賁門口平面之間的達80％，距賁門口平面1.6±0.9cm。 3新鮮標本的觀測結(jié)果3.1不同部位食管肌層厚度的測量：食管下段距賁門口4cm一段管壁肌

5、層厚度較食管上、中段的肌層厚度明顯蹭厚，而且差異非常顯著(P＜0.05)。 4顯微鏡下觀測結(jié)果4.1食管胃粘膜線的觀察：食管胃粘膜線上下的食管粘膜上皮和胃粘膜上皮分別為扁復層鱗狀上皮和單層柱狀上皮。 5電子顯微鏡下觀測結(jié)果5.1掃描電鏡下的觀察：食管體部肌纖維的表面比較平滑，LES肌纖維表現(xiàn)隆起外突，使得LES肌束外觀上顯得比食管體部的肌束更粗大。 結(jié)論：1食管胃粘膜線與賁門口不處于同一平面，高于賁門口水平1.6

6、±0.9cm。。 2食管上、中段與距賁門口4cm以內(nèi)的下段食管肌層厚度差異非常顯著，距賁門口4cm范圍內(nèi)的食管肌層明顯厚于食管上、中段的食管肌層。 3套索纖維和鉤狀纖維細胞漿內(nèi)有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線立體，表明其能量代謝率高于其它食管肌細胞。 第二部分人食管下括約肌M2、M3受體和D4、D5受體的免疫組化研究目的：探尋人食管下括約肌的多巴胺和乙酰膽堿受體的表達和分布的情況，揭示食管下括約肌的抗返流功能的內(nèi)在機制。

7、 方法：應用免疫組化的方法，研究鉤狀纖維和套索纖維以及食管環(huán)形肌、胃底環(huán)形肌、食管粘膜、胃粘膜的M2、M3和D4、D5分布與表達。表達程度的判定標準按Shimizu法，用卡方檢驗對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。 結(jié)果：1M2和M3的表達情況在25例食管粘膜、胃粘膜中，M2、M3均呈低表達；M2、M3在食管和胃粘膜中的表達無顯著差異； 結(jié)論：在鉤狀纖維、套索纖維中，存在M2、M3受體和D4、D5受體，其中M2、M3均高表達；D

8、4、D5均低表達。 第三部分應用RT-PCR方法檢測人食管下括約肌M2、M3受體和D4、D5受體的基因表達目的：探尋人食管下括約肌的多巴胺和膽堿能受體基因表達和分布的情況，從分子水平揭示食管下括約肌的抗返流機制。 方法：應用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應方法(RT-PCR)，研究鉤狀纖維和套索纖維的M2mRNA、M3mRNA和D4mRNA、D5mRNA分布與表達。 通過凝膠成像分析系統(tǒng)照相并對圖象進行分析，待測受體基因的表達

9、水平以待測受體基因灰度值與內(nèi)參灰度值的比值表示。用方差分析和t檢驗對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。 結(jié)果：1M2mRNA和M3mRNA的表達情況在25例食管粘膜、胃粘膜中，M2mRNA和M3mRNA的表達水平均呈低表達，二者無顯著性差異；在25例食管環(huán)行肌、胃底環(huán)行肌、鉤狀纖維、套索纖維中，M2mRNA的表達水平分別為0.394±0.054，0.398±0.047，0.411±0.023，0.409±0.044，四者均高表達，且四者間無顯

10、著性差異；在25例食管環(huán)行肌、胃底環(huán)行肌、鉤狀纖維、套索纖維中，M3mRNA的表達水平分別為0.133±0.043，0.136±0.075，0.141±0.016，0.145±0.023，四者均高表達，且四者間無顯著性差異。在以上四種肌組織中，M2mRNA表達明顯高于M3mRNA，二者有顯著差異(P＜0.01)；M2、M3在食管粘膜、胃粘膜的表達明顯低于在后四種肌組織中的表達，有顯著性差異(P＜0.01)。 結(jié)論：在鉤狀纖維、套

11、索纖維中，存在豐富的M2AchR、M3AchR，同時也存在著D4DR、D5DR。在平滑肌的運動功能上，與M3AchR相比，M2AchR處于優(yōu)勢。 結(jié)論1食管上、中段與距賁門口4cm以內(nèi)的下段食管.壁肌層厚度差異非常顯著，距賁門口4cm范圍內(nèi)的食管壁肌層明顯厚于食管上、中段的食管壁肌層。 2在LES肌細胞中，可見大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體，提示LES肌細胞中能量代謝較高。 3LES肌細胞中存在M2，M3，D4和D5，而