紅細(xì)胞不規(guī)則抗體及ABO亞型基因突變檢測(cè)分析.pdf

1、目的：⑴對(duì)住院患者輸血前ABO血型系統(tǒng)以外的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體進(jìn)行檢測(cè)并鑒定，分析其抗體產(chǎn)生的原因及種類；研究妊娠史、輸血史及年齡性別與抗體產(chǎn)生的相關(guān)性；通過(guò)鑒別抗體性質(zhì)幫助臨床選擇配合的血液，保障科學(xué)安全用血提供技術(shù)支持。⑵對(duì)血清學(xué)正反定型不符或抗原凝集強(qiáng)度減弱的患者血樣進(jìn)行 ABO基因第6內(nèi)含子和第7外顯子測(cè)序，分析其特點(diǎn)及突變規(guī)律，探討 ABO亞型基因表達(dá)的分子機(jī)制。
　　方法：①收集2015年5月至2016年9月份在溫州醫(yī)科

2、大學(xué)附屬第二醫(yī)院擬輸（備）血患者57344例，采用微柱凝膠抗人球蛋白法對(duì)患者進(jìn)行紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體篩查，陽(yáng)性者進(jìn)行抗體鑒定和分類。② 收集ABO正反定型不符或抗原凝集強(qiáng)度減弱的患者14例，采用抗-A、抗-B血型定型試劑對(duì)患者血液進(jìn)行正定型鑒定，采用標(biāo)準(zhǔn) A、B、O細(xì)胞對(duì)患者血液進(jìn)行反定型鑒定，采用抗-A1凝集素、抗-H單克隆抗體及吸收放散試驗(yàn)進(jìn)行亞型鑒定。③利用人類ABO血型A、B、cisAB、B（A）亞型基因分型試劑盒，采用PCR-

3、SSP技術(shù)擴(kuò)增ABO基因第6內(nèi)含子、第7外顯子進(jìn)行測(cè)序分析。
　　結(jié)果：⑴57344例患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性57例，陽(yáng)性率0.1％。其中男患者檢出29例、占50.9%（29/57）：有輸血史14例，無(wú)輸血史15例；女患者檢出28例，占49.1%（28/57）：有妊娠史22例（年齡范圍為28～80歲），占78.6%（22/28），無(wú)妊娠史6例（年齡范圍為2～13歲），占21.4%（6/28）。特異性抗體種類顯示，患者中不規(guī)則抗

4、體Rh系統(tǒng)37例，占65%（37/57），其中抗-D3例、抗-E21例、抗-C5例、抗-e4例、抗-c4例；還有Lea系統(tǒng)4例、MNS系統(tǒng)2例、自身抗體4例、未明確抗體10例。⑵14例樣本經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)、抗-A1、抗-H及吸收放散等試驗(yàn)，結(jié)果表現(xiàn)型A25例， A2B7例，A31例，弱B1例。⑶14例標(biāo)本經(jīng)基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)A205/0025例、A208/B1011例、A307/0021例、B(A)04/0023例、B(A)02/0023例、Bw

5、11/0021例。⑷DNA測(cè)序顯示：A205第7號(hào)外顯子存在nt1009 A＞G突變，導(dǎo)致多肽鏈第337位的精氨酸（Arg）轉(zhuǎn)變?yōu)楦拾彼幔℅ly）[R337G]；A208第7號(hào)外顯子存在539 G＞C突變，導(dǎo)致多肽鏈第180位的精氨酸（Arg）轉(zhuǎn)變?yōu)楦彼幔≒ro）[R180P]；A307第7外顯子存在nt745 C＞T錯(cuò)義突變，導(dǎo)致多肽鏈第249位的精氨酸（Arg）轉(zhuǎn)變?yōu)樯彼幔═rp）[R249W]；B（A）04第7外顯子存在nt6

6、40 A＞G突變，導(dǎo)致多肽鏈第214位的甲硫氨酸（Met）轉(zhuǎn)變?yōu)槔i氨酸（Val）[M214V]；B(A)02第7外顯子存在nt700 C＞G突變，導(dǎo)致多肽鏈第234位的脯氨酸（Pro）轉(zhuǎn)變?yōu)楸彼幔ˋla）[P234A]；Bw11第7外顯子存在nt695 T＞C突變，導(dǎo)致多肽鏈第232位氨基酸由亮氨酸（Leu）轉(zhuǎn)變?yōu)楦彼幔≒ro）[L232P]。
　　結(jié)論：①不規(guī)則抗體篩查結(jié)果發(fā)現(xiàn)Rh血型系統(tǒng)的抗體陽(yáng)性率最高，其中以抗-E抗體為

7、主，這些免疫抗體會(huì)嚴(yán)重影響輸血治療效果，因此做好不規(guī)則抗體篩查，明確抗體性質(zhì)，選擇相合的血液輸注，對(duì)保證輸血安全具有重要臨床意義。同時(shí)分析總結(jié)患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體分布特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)不同性別患者不規(guī)則抗體檢出率與年齡、既往免疫史的關(guān)聯(lián)性存在明顯差異。②14例血樣基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)A亞型7例：A205占35.7%（5/14），該亞型可能是漢族人群A亞型的熱點(diǎn)突變；A208的539 G＞C突變能導(dǎo)致A抗原的表達(dá)減弱，可以認(rèn)為 R180P突變是引起α-1