5個(gè)遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥家系紅細(xì)胞膜蛋白缺陷類型及基因突變譜研究.pdf

1、背景與目的:
　　遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥（hereditary spherocytosis，HS）是一種以貧血、黃疸、脾大為臨床特征的溶血性貧血。世界各地均有HS報(bào)道，在北歐和北美地區(qū)，該病的發(fā)病率可達(dá)1/2000。約75％的HS表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳，約25％的HS表現(xiàn)為常染色體隱形遺傳或新生突變。SPTA1、SPTB、ANK1、SLC4A1和EPB42基因突變導(dǎo)致α收縮蛋白、β收縮蛋白、錨蛋白、帶3蛋白、帶4.2蛋白缺陷或異常

2、。當(dāng)α收縮蛋白、β收縮蛋白、錨蛋白、帶3蛋白、帶4.2蛋白的其中一種或多種蛋白缺陷時(shí)可造成紅細(xì)胞膜骨架與脂質(zhì)雙層間的垂直聯(lián)接減弱，細(xì)胞膜以微囊泡形式丟失，紅細(xì)胞由正常雙凹圓盤狀變?yōu)榍蛐巍?br>　　HS的診斷通常需結(jié)合患者的病史，臨床表現(xiàn)，家族史以及實(shí)驗(yàn)室檢查。Paula H.B.Bolton-Maggs等在2011年發(fā)表的歐美HS診療指南中指出有HS家族史，有貧血、黃疸、脾大典型臨床癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢查有球形紅細(xì)胞增多、網(wǎng)織紅細(xì)胞增多、M

3、CHC增高的患者無需進(jìn)一步檢查即可診斷。然而，在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分HS患者并無以上所有的診斷依據(jù)，這些HS患者常被誤診漏診。SDS-PAGE是診斷HS的經(jīng)典方法，該方法可以確定HS患者為何種膜蛋白缺陷。然而SDS-PAGE敏感性較差，Mariagabriella Mariani等曾對300例HS進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)11％的HS用SDS-PAGE無法確定膜蛋白缺陷類型。
　　基因診斷技術(shù)的快速發(fā)展為HS的基因診斷帶來了新的方向。目前

4、已發(fā)現(xiàn)HS存在移碼突變、堿基置換突變、插入突變以及缺失突變等類型。然而至今尚未發(fā)現(xiàn)HS的熱突變位點(diǎn)。
　　方法:
　　本研究收集5個(gè)HS患者及其家系的外周血，提取紅細(xì)胞膜蛋白，利用SDS-PAGE分析患者紅細(xì)胞膜蛋白缺陷類型;提取患者外周血DNA，設(shè)計(jì)并合成相應(yīng)引物，通過PCR擴(kuò)增以得到目的產(chǎn)物，使用DNA直接測序方法，與NCBI數(shù)據(jù)庫內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對，探明基因突變形式。然后對其家屬進(jìn)行相關(guān)基因突變位點(diǎn)驗(yàn)證，以了解患者的突

5、變形式，初步探討HS患者分子發(fā)病機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　患者1為帶4.2蛋白完全缺陷，EPB42基因3號外顯子發(fā)生g.5935 G＞A雜合突變。患者2為帶3蛋白部分缺陷，SLC4A1基因4號外顯子發(fā)生g.6505C＞A雜合突變和SLC4A1基因4號內(nèi)含子發(fā)生g.6557 T＞C雜合突變?；颊?帶3蛋白為部分缺陷，SLC4A1基因4號外顯子發(fā)生g.6505 C＞A雜合突變?；颊?未發(fā)現(xiàn)蛋白有明顯缺陷，DNA測序表明患者的SPT

6、B基因29號內(nèi)含子發(fā)生g.55554 A＞T雜合突變?；颊?為帶3蛋白部分缺陷，SLC4A1基因5號外顯子發(fā)生g.7367 T＞G雜合突變。
　　結(jié)論:
　　1.SDS-PAGE對于紅細(xì)胞膜蛋白完全缺陷的HS患者有很好的診斷價(jià)值，但是對紅細(xì)胞膜蛋白部分缺陷的HS患者敏感性低。
　　2.重視家系調(diào)查和應(yīng)用MSCV等檢查指標(biāo)可以提高HS的診斷效率。
　　3.HS突變位點(diǎn)分布散在，同一個(gè)家系的HS患者表現(xiàn)為相同的突變方