戈謝病GBA基因突變分析.pdf

1、研究背景
　　戈謝病是一種常染色體隱性遺傳引起的溶酶體貯積病。由于葡糖腦苷脂酶GBA基因突變，葡糖腦苷脂酶活性降低或喪失，造成葡糖腦苷脂在巨噬細(xì)胞內(nèi)貯積，臨床上以肝脾腫大、貧血、血小板減少、骨骼破壞、生長(zhǎng)發(fā)育落后、反復(fù)癲癇發(fā)作和共濟(jì)失調(diào)為主。戈謝病預(yù)后不良，給病人及其家庭帶來(lái)很大痛苦，也給社會(huì)增加了沉重負(fù)擔(dān)。總結(jié)其臨床表現(xiàn)和骨髓穿刺結(jié)果，對(duì)疾病進(jìn)行早期診斷。同時(shí)為了減少該類(lèi)遺傳病的發(fā)生，基因診斷和遺傳咨詢工作漸提上日程。
　

2、　目的
　　現(xiàn)總結(jié)我院住院2個(gè)家系中2名戈謝病患兒的臨床表現(xiàn)及骨髓穿刺結(jié)果，通過(guò)基因測(cè)序研究分析其基因突變類(lèi)型，為這2個(gè)家系提供產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢。
　　方法
　　征得家屬知情同意后，該實(shí)驗(yàn)收集了2個(gè)無(wú)關(guān)的戈謝病家系的臨床資料和外周血樣，同時(shí)收集了10名正常兒童的外周血樣，以排除基因多態(tài)性。利用1ml血液基因組DNA提取試劑盒提取2名患者及其家屬的外周血基因組DNA。根據(jù)人類(lèi)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取的GBA基因序列設(shè)計(jì)引物，

3、采用聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReactiong,PCR)技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，應(yīng)用PCR產(chǎn)物回收試劑盒進(jìn)行PCR產(chǎn)物回收、純化，采用DNA直接測(cè)序的方法對(duì)GBA基因的外顯子及側(cè)翼序列測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果與GenBank中的序列進(jìn)行對(duì)比分析，查找基因突變位點(diǎn)及其類(lèi)型，對(duì)發(fā)現(xiàn)突變的采用TA克隆技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　結(jié)果
　　1.PCR擴(kuò)增片段與預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度一致，無(wú)非特異擴(kuò)增片段，可進(jìn)行純化和測(cè)序;
　　2.

4、家系1中先證者GBA基因第6外顯子發(fā)生4種突變，N188S(c.680A＞G)雜合突變，N188K(c.681T＞G)雜合突變，V191G(c.689T＞G)雜合突變，S196P(c.703T＞C)雜合突變，先證者父母及姐姐第6外顯子上訴4種突變也以雜合形式存在;
　　3.家系2中先證者及其父母GBA基因第6外顯子也發(fā)生上訴4種突變，同時(shí)先證者第9外顯子發(fā)現(xiàn)缺失突變c.1263_1317del55和D409H(c.1342G＞C)

5、純合突變，而先證者父母第9外顯子未發(fā)現(xiàn)異常。
　　結(jié)論
　　1.2個(gè)家系中的先證者臨床表現(xiàn)及骨髓穿刺結(jié)果符合戈謝病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷明確;
　　2.家系1和家系2中發(fā)現(xiàn)的4種突變N188S(c.680A＞G)，N188K(c.681T＞G)，V191G(c.689T＞G)，S196P(c.703T＞C)，考慮為GBA基因與GBA假基因所致，若要進(jìn)行進(jìn)一步鑒別，需進(jìn)一步對(duì)GBA基因第6外顯子重新設(shè)計(jì)引物并對(duì)家系1和家系2第