載鼠疫亞單位疫苗的多孔微球.pdf

1、鼠疫是由鼠疫耶爾森氏菌引起的人獸共患烈性傳染病，歷史上已經(jīng)有數(shù)以億計的人被鼠疫奪走了生命。免疫接種是預(yù)防鼠疫的重要措施之一，但目前的鼠疫疫苗都存在各自的問題：滅活疫苗生產(chǎn)安全性差，保護效率低，有效期短，副反應(yīng)率高，對肺鼠疫保護效果不佳：減毒鼠疫活菌苗，皮下注射對腺鼠疫保護效果好，但不良反應(yīng)較大，有潛在毒性，對肺鼠疫不能完全保護，免疫效果不確定；重組亞單位疫苗能夠克服傳統(tǒng)疫苗的許多缺陷，不含有感染性組分，無致病性，而且對腺鼠疫和肺鼠疫均具

2、有一定的免疫保護作用，但目前單純亞單位疫苗免疫效果仍不理想。由可生物降解材料制成的微球是疫苗的良好載體，同時也是一種佐劑，但通常在微球制備過程中，疫苗要經(jīng)受高機械剪切力和有機溶劑的考驗，容易失去活性，因此在獲得疫苗微球的過程中如何保持疫苗活性便成了關(guān)鍵問題。本文旨在研究一種可以避免傳統(tǒng)微球缺陷并保留其優(yōu)勢的以多孔微球為載體并具有佐劑效應(yīng)的鼠疫亞單位疫苗新型給藥系統(tǒng)，提高其肌肉注射和鼻黏膜給藥后的免疫效果。
　　 首先以生物可降解

3、材料聚乳酸一羥基乙酸共聚物( PLGA)為載體，分別以氯化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉為致孔劑，采用乳化溶劑揮發(fā)法來制備多孔微球，以光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡考察了微球形態(tài)學(xué)特征和粒徑大小。結(jié)果表明，三種致孔劑中，碳酸鈉的致孔效果最好，碳酸氫鈉次之，氯化鈉最差。其次，選擇碳酸氫鈉和碳酸鈉作為致孔劑，設(shè)計單因素多水平實驗考察了多種處方和工藝因素對所制得多孔微球孔隙率的影響，結(jié)果表明：隨著內(nèi)水相中致孔劑濃度的上升，微球孔隙率增大；固化過程中加入鹽酸的量越

4、多，孔隙率越低：隨著加入鹽酸時間的推移，微球孔隙率增高；不同處方和工藝因素對碳酸氫鈉和碳酸鈉作為致孔劑所制得多孔微球的影響相似，但以碳酸鈉作為致孔劑所制得的多孔微球均勻性更好，孔隙率更大。在此基礎(chǔ)上，確定以碳酸鈉作致孔劑，以牛血清白蛋白(BSA)為模型藥物，采用Lts(37)正交設(shè)計實驗考察了影響微球粒徑、包封率和載藥量的處方工藝因素。統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，微球粒徑分布較均勻，孔隙率較高，但吸附載藥量較低。其中顯著影響微球粒徑的處方工藝因素

5、為：內(nèi)水相中致孔劑的濃度和固化過程中加入鹽酸的量。致孔劑濃度增大，微球粒徑增大；固化過程中加入鹽酸的量增加，微球粒徑減小。顯著影響微球孔隙率和吸附載藥量的因素為內(nèi)水相中致孔劑的濃度、固化過程中加入鹽酸的量以及加入鹽酸的時間：致孔劑濃度增大，微球孔隙率和吸附載藥量都上升；固化過程中加入鹽酸的量增加，微球孔隙率和載藥量下降：加入鹽酸時間越靠后，微球孔隙率和載藥量上升。
　　 為了驗證多孔微球載疫苗后免疫的效果，以鼠疫F1抗原和V抗原

6、疫苗為目標(biāo)藥物，采用上述優(yōu)化處方工藝條件所制得的多孔微球，通過孵育法將鼠疫亞單位疫苗吸附于多孔微球之上，制成鼠疫亞單位疫苗的多孔微球給藥系統(tǒng)。鼠疫F1抗原和V抗原疫苗微球的載藥量分別是115 ug/mg和74 ug/mg。以雌性BALB/c小鼠為動物模型，以載鼠疫疫苗多孔微球組為實驗組，以單純抗原組和單純微球組為對照組，采用肌肉注射給藥方式考察了不同實驗組的免疫保護效果：通過ELISA法測定小鼠抗體滴度，通過攻毒實驗考察小鼠存活率。結(jié)果

7、顯示：采用肌注方式給藥，載鼠疫F1抗原的多孔微球和載鼠疫V抗原的多孔微球均顯示了良好的免疫保護效果，兩個實驗組的抗體滴度均比單純抗原或單純微球的對照組相應(yīng)的抗體滴度顯著要高(P<0.05)，攻毒實驗實驗組小鼠的存活率也顯著高于單純抗原或單純微球的對照組(P<0.01)。最后我們進行了載鼠疫亞單位疫苗多孔微球的鼻黏膜給藥免疫學(xué)評價，考察鼻黏膜給藥與肌肉注射給藥對鼠疫疫苗免疫學(xué)效果的影響，設(shè)計了不同的給藥途徑和給藥劑量組。初步結(jié)果顯示，目前

8、所制鼠疫疫苗多孔微球鼻黏膜免疫效果相對于肌肉注射的免疫效果要差。這可能因為微球在小鼠鼻腔清除速率過快，從而導(dǎo)致疫苗尚未達(dá)到起效時間便被清除，因而不能引起足夠的免疫應(yīng)答。
　　 綜上所述，本文以生物可降解材料PLGA為載體，采用乳化溶劑揮發(fā)法，通過在內(nèi)水相中加入碳酸鈉為致孔劑，制備獲得了多孔微球，該多孔微球孵育后可以吸附鼠疫F1抗原和V抗原的亞單位疫苗，經(jīng)注射給藥獲得了比單純抗原或單純微球更好的免疫保護效果。上述結(jié)果提示，本研究所