鼠疫雙組分疫苗的免疫學(xué)評價.pdf

1、目的：本課題以提取的鼠疫F1抗原和重組鼠疫V抗原免疫小鼠，豚鼠兩種動物模型，評價鼠疫亞單位疫苗的免疫效果，為鼠疫疫苗研制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：1.在小鼠動物模型上，本課題用F1和rV與氫氧化鋁進行物理混合后免疫小鼠。通過脾淋巴細胞增殖實驗、脾淋巴細胞細胞因子，流式細胞分析術(shù)和抗體滴度的測定四種方法對F1和rV蛋白疫苗的免疫原性進行了初步評價。2.在豚鼠動物模型上，實驗采用不同劑量的F1和rV抗原與氫氧化鋁佐劑進行物理混合后免疫

2、豚鼠，以探求合適的疫苗濃度；通過分離免疫后不同時間的外周血單個核細胞進行增殖實驗，對疫苗末次注射八周后的豚鼠進行過敏性遲發(fā)型超敏反應(yīng)實驗，并測定免疫后不同時間抗體滴度等實驗，對F1和rV蛋白疫苗的免疫原性進行了評價。3.在疫苗效力保護實驗中，通過不同劑量的鼠疫雙組分疫苗免疫小鼠，并于一周后用一定劑量的鼠疫菌株對實驗小鼠進行攻擊，選擇一定的時間對小鼠脾臟的細菌進行培養(yǎng)計數(shù)，從而觀察疫苗的保護效果。
　　 結(jié)果：1.小鼠動物模型結(jié)果

3、：ELISA檢測結(jié)果顯示F1+rV+Al(OH)3組有較強的體液免疫應(yīng)答；ELISPOT，MTT細胞增殖結(jié)果顯示F1+rV+Al(OH)3組在不同時間點經(jīng)F1，rV抗原刺激后分泌IFN-r的脾臟淋巴細胞數(shù)均高于其余各組。2.豚鼠動物模型結(jié)果：ELISA檢測結(jié)果顯示各疫苗組均有較強的體液免疫應(yīng)答，同時活疫苗組對F1抗原特異性的體液IgG效價明顯高于其余各組，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。MTT細胞增殖結(jié)果顯示不同劑量的疫苗組F1+rV組及活疫苗組在

4、不同時間點經(jīng)F1，rV抗原刺激后的增殖與陰性對照組無顯著性差異；遲發(fā)型超敏反應(yīng)顯示F1+rV復(fù)合疫苗能介導(dǎo)較強的細胞免疫應(yīng)答。3.疫苗效力保護實驗結(jié)果顯示陰性對照組有數(shù)量不等的菌落生長，而疫苗組小鼠脾臟均無細菌生長。
　　 結(jié)論：鼠疫雙組分疫苗能引起小鼠和豚鼠明顯的免疫應(yīng)答，Al(OH)3佐劑能夠顯著提高其應(yīng)答水平，同時對小鼠具有一定的保護力。確證了其與氫氧化鋁佐劑物理混合后能夠激發(fā)高水平的免疫應(yīng)答，為進一步研制新型鼠疫疫苗奠定