hVEGF基因工程生物膜的制備和鑒定.pdf

1、創(chuàng)傷愈合中最關鍵的過程是創(chuàng)面新生血管的生長,新生的血管床將為創(chuàng)面修復提供各種營養(yǎng)物質和細胞因子.加快創(chuàng)傷早期新生血管的生長對減少瘢痕組織形成和感染的發(fā)生有重大意義,并將最終影響到預后外觀和肢體功能恢復.該實驗用基因工程方法改造成纖維細胞,篩選出能夠持續(xù)分泌hVEGF(人血管內皮細胞生長因子)的細胞株,將該細胞種植于合適的細胞載體,制成基因工程生物膜,為難于愈合創(chuàng)面(如糖尿病性慢性潰瘍)的治療提供了有效方法.該實驗將含有hVEGF的穿梭質

2、粒pCDNA3-hVEGF導入NIH3T3細胞,使周G-418根據極限稀釋法篩選出7個單克隆細胞株.從中挑選出整合有hVEGF基因且表達hVEGF最高的一個細胞克隆在DNA水平,mRNA水平和蛋白質的表達水平進行鑒定,同時使用MTT,雞胚實驗檢測表達產物的生物學活性.結果顯示:PCR和SouthernBlot證明hVEGF基因已整合入NIH-3T3細胞基因組,RT-PCR和Northem Blot則表明該細胞株能夠表達hVEGF-mRN

3、A.hVEGF-ELlsA 證實在蛋白質水平該細胞株能夠持續(xù)表達hVEGF個月以上,并始終保持非常高的水平.在此基礎上,將該細胞種植于三種生物膜(甲殼素,絲素膜和Biobrane),并比較其在此三種生物膜上的生長情況.結果顯示:Biobrane為最適支持物.進一步檢測發(fā)現:該工程細胞不僅可以在Biobrane上良好生長,而且仍舊能夠表達高水平的hVEGF.同時繪制了該細胞在Biobrane上的生長曲線,得到它在Biobrane上生長狀況