14 基因工程和基因重組44

1、1第十四章第十四章基因重組與基因工程基因重組與基因工程內(nèi)容提要：內(nèi)容提要：細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移包括接合作用、轉(zhuǎn)化作用、轉(zhuǎn)導(dǎo)作用等。當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞或細(xì)菌通過(guò)菌毛相互接觸時(shí)，質(zhì)粒DNA從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)胞，這種類型的DNA轉(zhuǎn)移稱為接合作用。通過(guò)自動(dòng)獲取或人為的供給外源DNA，使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。由病毒攜帶將宿主DNA片段從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞的現(xiàn)象或機(jī)制，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。在接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)座過(guò)程中，不同

2、DNA分子間發(fā)生的共價(jià)連接即為重組。重組DNA技術(shù)是在人們對(duì)自然界基因轉(zhuǎn)移和重組的認(rèn)識(shí)基礎(chǔ)上創(chuàng)立的新技術(shù)。為研究基因的結(jié)構(gòu)與功能，從構(gòu)建的基因組DNA文庫(kù)或cDNA文庫(kù)分離、擴(kuò)增某一感興趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又稱重組DNA技術(shù)。一個(gè)完整的基因克隆過(guò)程應(yīng)包括：1分，即目的基因的獲取及基因載體的選擇。目的基因指科學(xué)家感興趣的外源基因，其來(lái)源有幾種途徑：化學(xué)合成、PCR技術(shù)、基因組文庫(kù)或cDNA文庫(kù)中獲得。載體是目的基因的攜帶者，常

3、用的載體有質(zhì)粒、噬菌體等。2切，即限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用。限制性內(nèi)切酶是識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶，是實(shí)現(xiàn)重組DNA技術(shù)的重要的工具酶。3接，即將目的基因與載體連接形成重組體（或重組DNA）。4轉(zhuǎn)，即將重組體導(dǎo)入宿主菌（或細(xì)胞），根據(jù)采用的載體性質(zhì)不同，將重組體導(dǎo)入宿主菌的方法有轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染及感染。5篩，即重組體的篩選與鑒定，將重組體導(dǎo)入宿主菌后，通過(guò)適當(dāng)形式的培養(yǎng)板生長(zhǎng)即可獲得一定的抗藥菌落。利

4、用原位雜交，和Southern印跡或免疫學(xué)方法對(duì)抗藥菌落進(jìn)行篩選，獲得含目的基因的轉(zhuǎn)化子菌落，再經(jīng)擴(kuò)增、分離重組DNA獲得基因克隆。重組DNA技術(shù)在疾病基因的發(fā)現(xiàn)，表達(dá)有藥用價(jià)值的蛋白質(zhì)，DNA診斷及疾病的預(yù)防等方面具有廣泛應(yīng)用價(jià)值，并促進(jìn)了當(dāng)代分子醫(yī)學(xué)的誕生和發(fā)展。一、選擇題一、選擇題【A型題型題】1下列DNA序列屬于回文結(jié)構(gòu)的是（）AATGCCGTACGGCBGAATTCCTTAAGCGGCCGGCCGGCCDTCTGACAGACT

5、GECTAGGGGATCCC2DNA經(jīng)限制性內(nèi)切核酸酶切割后，斷端易于首尾相接，自行成環(huán)。這是因?yàn)榇嬖谥ǎ?C基本重組D隨機(jī)重組E人工重組18在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的是DNA（）A聚合酶B解鏈酶C連接酶D拓?fù)涿窫內(nèi)切酶19在重組DNA技術(shù)領(lǐng)域所說(shuō)的分子克隆是指（）A建立單克隆抗體B建立多克隆抗體C構(gòu)建重組DNA分子D無(wú)性繁殖DNAE有性繁殖DNA20無(wú)性繁殖依賴DNA載體的最基本性質(zhì)是（）A青霉素抗性B卡那霉素抗性C

6、自我復(fù)制能力D自我轉(zhuǎn)錄能力E自我表達(dá)能力21在已知序列的情況下獲得目的DNA最常見(jiàn)的是（）A化學(xué)合成法B篩選基因組文庫(kù)C篩選cDNA文庫(kù)D聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)EDNA合成儀合成22重組DNA技術(shù)領(lǐng)域常用的質(zhì)粒DNA是（）A細(xì)菌染色體DNA的一部分B細(xì)菌染色體外的獨(dú)立遺傳單位C病毒基因組DNA的一部分D真核細(xì)胞染色體DNA的一部分E真核細(xì)胞染色體外的獨(dú)立遺傳單位23直接針對(duì)目的DNA進(jìn)行篩選的方法是（）A青霉素抗藥性B氨芐青霉素抗藥性C分子雜交

7、D分子篩E電泳24“克隆”某一目的DNA的過(guò)程不包括（）A基因載體的選擇與構(gòu)建B外源基因與載體的拼接C重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞D篩選并無(wú)性繁殖含重組分子的受體細(xì)胞E表達(dá)目的基因編碼的蛋白質(zhì)25表達(dá)人類蛋白質(zhì)的最理想的細(xì)胞體系是（）AEcoli表達(dá)體系B原核表達(dá)體系C酵母表達(dá)體系D昆蟲表達(dá)體系E哺乳類細(xì)胞表達(dá)體系26不能用作克隆載體的DNA是（）A質(zhì)粒DNAB噬菌體DNAC細(xì)菌基因組DNAD腺病毒DNAE逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA27關(guān)于重組體的

8、敘述，下列哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的（）A包括外源性的目的基因B包括載體C重組體有獨(dú)立繁殖的能力D重組體要回到細(xì)胞水平表達(dá)E目的基因和載體通過(guò)連接酶連接28基因組代表一個(gè)細(xì)胞或生物體的（）A.部分遺傳信息B整套遺傳信息C可轉(zhuǎn)錄基因D非轉(zhuǎn)錄基因E可表達(dá)基因29下列常用于原核表達(dá)體系的是（）A酵母細(xì)胞B昆蟲細(xì)胞C哺乳類細(xì)胞D真菌E大腸桿菌30構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)時(shí)，首先需分離細(xì)胞的（）A.染色體DNAB線粒體DNAC總mRNADtRNAErRNA31構(gòu)建