氣傳真菌與塵螨在哮喘中作用的研究.pdf

1、近二十年來,西方發(fā)達國家和我國大城市哮喘患病率迅速上升,哮喘已經(jīng)成為全球性重要公共衛(wèi)生問題。空氣生物性污染物被認為引起哮喘和呼吸道炎性反應(yīng)的最重要原因,其中氣傳真菌和塵螨則是目前被國內(nèi)外普遍認為的哮喘發(fā)生和發(fā)作中最重要的室內(nèi)生物危險因素,也是當(dāng)前國內(nèi)外哮喘環(huán)境病因研究中的重要內(nèi)容和熱點問題。
　　 本次課題通過整體動物實驗的方法研究霉菌和塵螨對哮喘的可能致病機制。通過人群流行病學(xué)的研究方法,研究哮喘的可能的危險因素及在哮喘患者中

2、的分布情況。
　　 第一部分培養(yǎng)互隔交鏈孢霉及收集其孢子。本研究利用空氣曝平皿法對氣傳真菌進行了采樣,通過培養(yǎng)、分離、接種、鑒定獲取互隔交聯(lián)孢霉的菌株,通過菌株的培養(yǎng),獲取了大量的互隔交鏈孢霉的純凈孢子懸液,將孢子懸液濃度分別調(diào)整為4×107/mL和4×106/mL。
　　 第二部分以C57BL/6小鼠為試驗對象,應(yīng)用互隔交鏈孢霉的孢子構(gòu)建小鼠哮喘模型。36只C57BL/6小鼠分為3組,模型組、陽性對照組和陰性對照組各1

3、2只小鼠。模型組以互隔交鏈孢霉孢子懸液致敏和激發(fā)小鼠,分別于第0、5、10天腹腔注射霉菌孢子懸液,第14天開始連續(xù)4天鼻滴霉菌孢子懸液。陽性對照組以雞卵蛋白(OVA)為致敏劑和激發(fā)劑;陰性對照組以磷酸緩沖液(PBS)腹腔注射(I.p.)PBS,致敏及激發(fā)時間安排與模型組組相同。最后一次鼻滴(I.n.)激發(fā)結(jié)束24h后,進行肺組織病理檢查,支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細胞計數(shù)分類和總蛋白濃度測定,ELISA測定BALF中的白細胞介素4(

4、IL-4)和干擾素-γ(IFN-γ)及血漿中的總免疫球蛋白E(IgE)和特異性IgE(SIgE),測定小鼠氣道阻力及肺順應(yīng)性。結(jié)果顯示:模型組BALF中細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞比例、IL-4、總蛋白水平較陰性對照組明顯升高,有統(tǒng)計學(xué)意義;而BALF上清中IFN-γ水平顯著低于陰性對照組。血漿中總IgE和特異性IgE較陰性對照組明顯升高,有統(tǒng)計學(xué)意義。小鼠氣道阻力較陰性對照相比有明顯升高;肺順應(yīng)性較陰性對照有明顯降低,均有統(tǒng)計學(xué)意義。病理檢

5、查發(fā)現(xiàn)模型組和陽性對照組肺組織可見明顯炎癥細胞浸潤、彈性纖維斷裂消失、黏液增多,而陰性對照組則未見。綜上表明小鼠哮喘模型構(gòu)建成功。
　　 第三部分采用C57BL/6小鼠為試驗對象,觀察粉塵螨對哮喘小鼠氣道炎癥及反應(yīng)性的影響。將48只C57BL/6小鼠分為4組,分別為對照組、哮喘組、粉塵螨鼻滴對照組和粉塵螨鼻滴哮喘組。哮喘組,用制備的互隔鉸鏈孢霉孢子懸液致敏和激發(fā)建立小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)性炎癥模型。致敏及激發(fā)步驟:分別于第0、5、10

6、天腹腔注射孢子懸液,第14、15、16、17天,孢子懸液緩慢鼻滴小鼠,30分鐘后再給每只小鼠鼻滴PBS。粉塵螨鼻滴哮喘組,致敏及激發(fā)安排與哮喘相同,在每次激發(fā)30分鐘后再給每只小鼠鼻滴粉塵螨提取液。對照組致敏及激發(fā)時間安排與哮喘組相同,腹腔注射PBS致敏,鼻滴PBS激發(fā),30分鐘后再次鼻滴PBS;粉塵螨鼻滴對照組,致敏及激發(fā)安排與對照組相同,每次激發(fā)30分鐘后再次給小鼠鼻滴粉塵螨提取液。最后一次鼻滴24h后進行肺組織病理檢查,支氣管肺泡

7、灌洗液(BALF)中細胞計數(shù)分類和總蛋白濃度測定,測定小鼠氣道阻力及肺順應(yīng)性。結(jié)果顯示粉塵螨鼻滴哮喘組BALF中細胞總數(shù)與哮喘組比較有統(tǒng)計學(xué)意義,病理檢查發(fā)現(xiàn)除對照組外,其他幾組肺組織均可見明顯炎癥細胞浸潤、彈性纖維斷裂消失、黏液增多。
　　 第四部分開展了兒童哮喘和過敏癥狀的環(huán)境危險因素的流行病學(xué)調(diào)查研究。通過橫斷面研究,調(diào)查常見變應(yīng)原在哮喘兒童中的分布情況,尋找出主要哮喘兒童變應(yīng)原。經(jīng)對43例兒童進行皮膚點刺試驗發(fā)現(xiàn)哮喘兒童

8、變應(yīng)原中粉塵螨的陽性率第一,為51.2％。并通過基于醫(yī)院的病例對照研究,收集研究對象的一般社會人口學(xué)特征、過敏史、家族史及室內(nèi)環(huán)境等信息,以尋找兒童哮喘的環(huán)境危險因素的線索。對調(diào)查所得資料進行單因素分析后,發(fā)現(xiàn)父母哮喘病史、兒童過敏史、兒童呼吸道感染情況是哮喘發(fā)病的危險因素。
　　 本研究的結(jié)果提示有必要在我國特別是人口眾多的大城市地區(qū)加強哮喘的疾病報告體系,并且開展室內(nèi)霉菌、塵螨及其他致敏性污染物的環(huán)境暴露水平的監(jiān)測,還應(yīng)進一