血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對(duì)肺癌診斷價(jià)值的研究.pdf

1、背景：肺癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤，是我國(guó)發(fā)病率和致死率最高的癌癥之一。由于診斷手段的限制大多患者在確診時(shí)已發(fā)展到中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)機(jī)。實(shí)現(xiàn)肺癌的早期診斷且進(jìn)行有效地治療成為提高患者存活率的關(guān)鍵。循環(huán)DNA樣本的取得實(shí)時(shí)、無(wú)創(chuàng)為肺癌的早期診斷帶來(lái)了福音。
　　目的：通過(guò)分子生物學(xué)的手段發(fā)現(xiàn)靈敏度和特異性高的外周血生物標(biāo)志物是工作的關(guān)鍵。我們對(duì)血漿循環(huán)DNA進(jìn)行兩方面的研究：一是評(píng)價(jià)血漿循環(huán)DNA完整性對(duì)肺癌診斷的價(jià)值。二是

2、探討血漿循環(huán) DNA甲基化與肺癌的相關(guān)性。
　　方法：制備重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，建立實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)血漿DNA水平的方法，分別檢測(cè)78例肺癌患者、78例健康人血漿中長(zhǎng)度為102bp和377bp的β-actin(ACTB)片段水平，并分析血漿DNA的完整性（ACTB377/ACTB102）。利用受試者工作特征曲線(ROC)評(píng)價(jià)血漿循環(huán)DNA水平及完整性在肺癌診斷中的價(jià)值。采用多重置換擴(kuò)增(Multiple displacement amp

3、lification，MDA)技術(shù)聯(lián)合巢式甲基化特異性PCR(nest methylation specific PCR，nMSP)法，檢測(cè)78例肺癌患者、78例健康人血漿樣本中基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果：建立了檢測(cè)循環(huán) DNA水平的可靠方法。肺癌患者循環(huán)DNA長(zhǎng)、短片段的水平均顯著高于健康對(duì)照組（P<0.0001），ROC曲線下面積(AUC)分別為0.833、0.742。肺癌患者血漿循環(huán)DNA完整度（0.2082±0.

4、1328）高于健康對(duì)照組血漿 DNA完整度（0.07796±0.0386），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ROC曲線下面積(AUC)為0.912。肺癌患者血漿DNA水平與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小等臨床病理參數(shù)均無(wú)相關(guān)性。血漿樣本中 CDH13、RASSF1A、DLEC1、SEPT9、RUNX3基因啟動(dòng)子甲基化率分別為53.85％(42/78)、42.31%(33/78)、51.28%(40/78)、37.18%(29/78)、21.79%(