FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化在肺癌診斷中的價值.pdf

1、背景:
　　目前，肺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)處于首位，其還是成為許多國家惡性腫瘤死亡的主要原因。臨床上，通過影像學(xué)、支氣管鏡、CT引導(dǎo)下肺穿刺活檢等技術(shù)來確診肺癌，但在已診斷明確肺癌中75％都是晚期或者轉(zhuǎn)移。在西方國家，肺癌的5年生存率不到15％，在發(fā)展中國家如亞太地區(qū)、印度，5年生存率甚至不到9％。隨著影像學(xué)、支氣管鏡和痰脫落細(xì)胞的技術(shù)成熟和先進(jìn)，但肺癌患者的死亡率未能得到很大的降低和改善。需要更多的科研及臨床工作者盡可能探尋早期

2、篩檢肺癌的靈敏和特異方法，積極探索肺癌早期的預(yù)警信號。近年來，篩選和挖掘肺癌的生物標(biāo)志物已經(jīng)成為熱點(diǎn)研究領(lǐng)域?；虻墓δ馨l(fā)生可遺傳、可逆性的改變，而基因的序列并未同時改變，此為表觀遺傳學(xué)。其表現(xiàn)形式主要是DNA甲基化，是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中較常見的早期事件，可作為早期診斷肺癌的新型標(biāo)記。抑制基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化水平升高使其轉(zhuǎn)錄失活，使腫瘤發(fā)生。肺癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、前列腺癌等惡性腫瘤都與啟動子CpG位點(diǎn)甲基化有關(guān)。

3、脆性組氨酸三聯(lián)體基因(fragile histidinetr iadgene，F(xiàn)HIT)、O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶(O6-Methyl guanine-DNA methyl transferase，MGMT)和Ras相關(guān)區(qū)域家族1A(Rasassociationdomain familymember-1，RASSF1A)基因啟動子CpG島甲基化已成為研究發(fā)生肺癌機(jī)制的主要方面，其有可能成為預(yù)測早期肺癌的重要生物標(biāo)志。

4、　　目的:
　　探討外周血FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　對象和方法
　　1.收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院和胸科醫(yī)院2012年10月至2013年3月期間收治的原發(fā)性肺癌患者137例，所有病例均已經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診，且未經(jīng)過手術(shù)和化療的血液標(biāo)本。還有收集138例肺良性患者標(biāo)本，141例已排除全身各器官惡性腫瘤的同期健康體檢人群。血標(biāo)本的采集和流行病學(xué)資料的搜集均由醫(yī)生在征得受試

5、者知情同意后實(shí)施。
　　2.檢測基因的甲基化水平:對研究基因(FHIT、MGMT和RASSF1A)啟動子序列的甲基化水平，采取實(shí)時熒光定量甲基化特異性PCR的方法來進(jìn)行檢測。
　　3.數(shù)據(jù)分析、處理:采用SPSS12.0，采用中位數(shù)(M)和四分位間距(P25、P75)對不符合正態(tài)分布的連續(xù)性變量進(jìn)行描述。采用x2檢驗(yàn)對定性資料進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對于定量資料，若為偏態(tài)分布，則采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)對兩獨(dú)立樣本之間的比較

6、進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用KruskalWallis檢驗(yàn)對多組獨(dú)立樣本之間的比較進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。分析肺癌與性別、年齡、吸煙、甲基化水平的危險(xiǎn)相關(guān)性，采用多因素非條件logistic回歸分析方法。分析FHIT、MGMT和RASSF1A基因甲基化水平對肺癌診斷的價值，可采用受試者操作特性(receiveroperatingcharacteristics，ROC)曲線來進(jìn)行，并以曲線下面積為判斷基準(zhǔn)，a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)（雙側(cè)）。
　　結(jié)果:<

7、br>　　1.肺癌組FHIT、MGMT和RASSF1A基因的甲基化水平均高于肺良性組和正常對照組，差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，P=0.000，P=0.001);采用偏態(tài)分布的定量資料Mann-WhitneyU檢驗(yàn)或KruskalWallis檢驗(yàn)分析年齡、性別、吸煙、病理組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期與FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化率的關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.按FHIT、MGM

8、T和RASSF1A基因啟動子甲基化水平的百分位數(shù)25％、50％、75％的分界點(diǎn)分別把肺癌組和對照組，肺癌組和肺良性各分為4層，采用非條件logistic回歸分析，結(jié)果顯示FHIT、MGMT和RASSF1A基因甲基化水平的增加，患肺癌的危險(xiǎn)性增加。在肺癌組和正常組的多因素logistic回歸分析模型中，F(xiàn)HIT、MGMT、RASSF1A隨著其甲基化水平升高，患肺癌的危險(xiǎn)性明顯增加(P=0.000，P=0.000，P=0.024)，高年齡和

9、吸煙可增加患肺癌的危險(xiǎn)性(P=0.003，P=0.014);在肺癌組和肺良性組的多因素logistic回歸分析模型中，隨著FHIT、MGMT甲基化水平升高，患肺癌的危險(xiǎn)性增加(P=0.040，P=0.005)，而RASSF1A隨其甲基化水平，患肺癌的危險(xiǎn)性可能性很大(P=0.112)。
　　3.檢測單一指標(biāo)及聯(lián)合檢測多個指標(biāo)對肺癌的診斷價值的比較。結(jié)果顯示聯(lián)合3個指標(biāo)的甲基化水平比單個指標(biāo)檢測對肺癌診斷價值高，單個指標(biāo)檢測中，對肺

10、癌診斷價值大小依次為MGMT(AUC=0.781)、FHIT(AUC=0.776)、RASSF1A(AUC=0.729);ROC曲線評價檢測單一及多個指標(biāo)聯(lián)合檢測對Ⅰ+Ⅱ期肺癌的診斷價值的比較。結(jié)果顯示聯(lián)合3個指標(biāo)的甲基化水平比單個指標(biāo)檢測對Ⅰ+Ⅱ期肺癌診斷價值高，單個指標(biāo)檢測中，對早期肺癌診斷價值大小為FHIT(AUC=0.797)、MGMT(AUC=0.783)、RASSF1A(AUC=0.725)。
　　結(jié)論:
　　1

11、.外周血FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化和肺癌有關(guān);不同年齡、性別和吸煙史的患者FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化水平無明顯差別，不同的病理類型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不同的臨床分期，相應(yīng)基因的甲基化水平亦無差別。
　　2.隨著FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化水平增加，患肺癌的危險(xiǎn)增加。
　　3.聯(lián)合檢測FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化水平對肺癌的診斷價值高，