探討?yīng)毣罴纳鷾珜?duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨保護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察獨(dú)活寄生湯干預(yù)兔0A模型血清及關(guān)節(jié)腔積液IL-1、TNF-α的影響，采用蛋白組學(xué)技術(shù)篩選出獨(dú)活寄生湯干預(yù)兔0A模型關(guān)節(jié)軟骨差異表達(dá)蛋白，進(jìn)一步通過Western驗(yàn)證兔0A模型關(guān)節(jié)軟骨Wnt相關(guān)蛋白，找到獨(dú)活寄生湯可能作用靶點(diǎn)，探討?yīng)毣罴纳鷾目寡着c軟骨保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.兔30只，采用石膏伸直位固定8周法制作兔膝骨關(guān)節(jié)炎(0A)模型，隨機(jī)分為空白組、模型組、獨(dú)活寄生湯組，每組10只。空白

2、組兔正常飼養(yǎng)，未造模，8周后每日灌胃生理鹽水1次;模型組兔制作0A模型，8周后每日灌胃生理鹽水1次;獨(dú)活寄生湯組兔制作0A模型，8周后每日獨(dú)活寄生湯煎劑灌胃1次;各組共治療4周，4周后處死兔，收集血清、關(guān)節(jié)腔積液、膝關(guān)節(jié)軟骨。2.膝關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)HE染色，光鏡下觀察各組兔的病理改變，依據(jù)改良的Mankin關(guān)節(jié)軟骨病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)軟骨進(jìn)行半定量評(píng)分。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)兔血清、關(guān)節(jié)腔積液IL-1、TNF-α水平;3.提取各組兔膝關(guān)節(jié)

3、脛骨關(guān)節(jié)軟骨的蛋白質(zhì)后，經(jīng)過雙向凝膠電泳分離蛋白，ImagescannerⅡ掃描儀平板上圖像掃描， ImageMaster2-DE Platinum6軟件對(duì)凝膠圖像進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用Corbett方法GE公司的ImageMaster檢測(cè)凝膠內(nèi)蛋白質(zhì)點(diǎn)，參照Gharahdaghi等建立的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行蛋白質(zhì)膠內(nèi)酶解，肽段樣品結(jié)晶后，使用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。采用陽離子反射模式掃描肽段PMF，掃描質(zhì)量范圍800-3500

4、Da。使用GPS軟件綜合分析MS/MS。進(jìn)行網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫比對(duì)，EXPASY分析所有差異蛋白質(zhì)的信息，使用PATHWAY Studio軟件分析重要差異蛋白質(zhì)的調(diào)控通路。4.篩選出差異蛋白后，提取軟骨組織蛋白，Western blot法檢測(cè)各組兔軟骨組織wnt3a、β-連環(huán)蛋白、MMP13蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.病理結(jié)果顯示，空白組軟骨關(guān)節(jié)表面光滑、平整，光鏡下軟骨細(xì)胞分層排列清楚，潮線清晰、完整;而模型組軟骨關(guān)節(jié)表面欠