電針對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨水通道蛋白3表達(dá)的影響.pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種以關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性退變、破壞以及骨贅形成為特征的慢性骨關(guān)節(jié)病，好發(fā)于膝關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、脊柱以及遠(yuǎn)端指間關(guān)節(jié)等負(fù)重較大的關(guān)節(jié)。臨床可產(chǎn)生關(guān)節(jié)疼痛，活動(dòng)受限和關(guān)節(jié)畸形等癥狀。膝關(guān)節(jié)是OA最常發(fā)生的部位，研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白3(Aquaporin3，AQP3)能夠推動(dòng)膝OA的發(fā)展，膝OA患者軟骨細(xì)胞的AQP3表達(dá)明顯高于正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。膝OA作為一種老年進(jìn)行性退化性疾病，目前尚無(wú)徹底治愈的

2、手段，主要采取手術(shù)和非手術(shù)治療來(lái)延緩病情的進(jìn)展，而電針是一種具有較好臨床療效的非手術(shù)治療方式。目前電針治療膝OA的臨床觀察較多，但以其作為干預(yù)手段進(jìn)行作用機(jī)制研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)卻比較少見(jiàn)。因此，本課題采用管型石膏伸膝位固定制動(dòng)法固定6周制作兔膝OA模型，電針干預(yù)4周的治療，來(lái)探討電針對(duì)兔膝OA發(fā)展及其關(guān)節(jié)軟骨中AQP3表達(dá)的影響以及通過(guò)調(diào)控AQP3的表達(dá)來(lái)干預(yù)膝OA發(fā)展的可行性，為膝OA的治療尋找新靶點(diǎn)。
　　方法:(1)預(yù)實(shí)驗(yàn):瀘州

3、醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心采購(gòu)健康新西蘭大白兔5只，雌雄不拘，重量2.3-3.2kg，取右后膝關(guān)節(jié)用管型石膏固定在膝關(guān)節(jié)伸直位，固定范圍從腹股溝平面下1.5cm到踝關(guān)節(jié)下3cm處。制動(dòng)6周后，手術(shù)刀切取股骨內(nèi)側(cè)髁及脛骨平臺(tái)的軟骨組織，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色。結(jié)果可見(jiàn)軟骨細(xì)胞排列紊亂、有增生，軟骨表面變薄、有裂隙產(chǎn)生、軟骨組織纖維化，軟骨和滑膜腫脹，有炎細(xì)胞的浸潤(rùn)，滑膜增生。與骨關(guān)節(jié)炎的病理表現(xiàn)復(fù)合，說(shuō)明造模成功。(2)對(duì)象和干預(yù)措施:瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)

4、驗(yàn)動(dòng)物中心再次采購(gòu)健康新西蘭大白兔36只，雌雄不拘，重量2.3-3.2kg，采用隨機(jī)數(shù)字表法將36只白兔隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，每組各12只。空白對(duì)照組不做任何處理，模型組和電針治療組均造模，6周后，取下石膏管型。模型組造模后不做電針治療，只在電針治療組電針的同時(shí)用相同的姿勢(shì)綁在治療臺(tái)上;電針治療組自取下石膏當(dāng)天開(kāi)始給予電針治療。取血海、犢鼻、陰陵泉、陽(yáng)陵泉、足三里、梁丘6穴，接3組電針儀輸出線，輸出頻率為2Hz的疏波，留針

5、20min，每日1次，連續(xù)治療14天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采用頸椎脫臼法處死所有兔子，觀察相關(guān)指標(biāo)的變化。(2)指標(biāo)的觀察:①依照改良的Mankin's評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)空白對(duì)照組、模型組、電針治療組3組兔右后膝關(guān)節(jié)軟骨大體形態(tài)采用肉眼觀察的方法進(jìn)行量化評(píng)分;②手術(shù)刀切取空白對(duì)照組、模型組、電針治療組3組兔右后膝關(guān)節(jié)的股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，用10％中性甲醛溶液固定后，再行石蠟包埋和切片，作HE染色，依照改良的Mankin's評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)軟骨細(xì)胞的形態(tài)采用光鏡的

6、方法對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行量化評(píng)分;③酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)膝關(guān)節(jié)液中AQP3表達(dá):用抗兔人AQP3的ELISA試劑盒檢測(cè)所采集兔右后膝關(guān)節(jié)液中AQP3的表達(dá)。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所得計(jì)量資料結(jié)果采用(x)±s表示，采用t檢驗(yàn)比較兔軟骨細(xì)胞評(píng)分、軟骨結(jié)構(gòu)評(píng)分、HE染色評(píng)分和潮線完整性評(píng)分，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。<

7、br>　　結(jié)果:(1)軟骨大體形態(tài)觀察:空白對(duì)照組12只兔右后膝關(guān)節(jié)無(wú)關(guān)節(jié)積液，無(wú)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，軟骨表面光滑、無(wú)裂紋，呈藍(lán)白色，色深明亮。軟骨大體形態(tài)的改良Mankin's評(píng)分為0分。模型組右后膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯關(guān)節(jié)積液，軟骨表面粗糙、有裂紋、光澤度降低，有炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，軟骨表面呈灰黃色，部分出現(xiàn)糜爛和潰瘍;電針治療組與模型組情況類(lèi)似，但損害程度較輕，按改良的Mankin's評(píng)分比較軟骨結(jié)構(gòu)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。(2) H

8、E染色病理學(xué)觀察:空白對(duì)照組示關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位置排列整齊，細(xì)胞大小相同，潮線完整;軟骨層厚度一致，軟骨表面平坦整齊;模型組軟骨層存在缺損，軟骨層變薄，軟骨細(xì)胞減少明顯，細(xì)胞大量簇聚，潮線紊亂;電針治療組關(guān)節(jié)軟骨表面無(wú)明顯缺失，軟骨細(xì)胞排列較模型組整齊，數(shù)量較模型組增多，層厚較模型組增厚，可見(jiàn)潮線紊亂。將空白對(duì)照組與模型組、模型組與電針治療組的改良的Mankin's評(píng)分結(jié)果進(jìn)行比較，差異均有顯著性意義（P＜0.05）。(3)免疫學(xué)ELISA