白樺愈傷組織再生系統(tǒng)的體細(xì)胞無性系變異研究.pdf

1、本文以白樺(Betulaplatyphalla)5個(gè)優(yōu)良無性系為研究材料，取葉片作為外植體，用IS附加不同濃度的BA作為培養(yǎng)基，對白樺愈傷組織再生途徑的快繁系統(tǒng)進(jìn)行了研究；同時(shí)對愈傷組織及其再生植株的染色體數(shù)目變異進(jìn)行了研究，對基因組DNA變異進(jìn)行了AFLP分析，結(jié)果如下：1.篩選出IS+(3～5mg/L)BA+0.5mg/LKT+2％蔗糖是誘導(dǎo)白樺愈傷組織繁殖的最優(yōu)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率達(dá)到80％以上；誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織，在IS+0.4mg/

2、LBA+2％蔗糖分化培養(yǎng)基中出芽率高達(dá)90％以上。 2.建立了白樺葉片直接出芽的再生系統(tǒng)：即在IS+(10.0～15.0mg/L)BA+0.5mg/LKT+2％蔗糖誘導(dǎo)20天，然后在IS+0.4mg/LBA+2％蔗糖分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天能達(dá)到直接出芽，每片葉片的叢生芽多達(dá)20～30個(gè)，質(zhì)量較高。 3.體細(xì)胞無性系的染色體數(shù)目變異模式：利用BA誘導(dǎo)的愈傷組織及其再生植株的染色體數(shù)目均發(fā)生不同程度的變異，隨著BA濃度的增加

3、，再生植株二倍體細(xì)胞比例由50％逐漸下降到39.75％；由5.0mg/LBA誘導(dǎo)的愈傷組織再生植株與對照相比染色體數(shù)目變異較小，變異率為40.75％；另外，隨著繼代培養(yǎng)時(shí)間的增加，再生植株二倍體細(xì)胞比例由57％劇減到30％。 4.體細(xì)胞無性系的DNA水平變異模式：隨著BA濃度的提高，再生植株的DNA多態(tài)性片段的比例明顯提高，由BA低濃度時(shí)的38.73％上升到高濃度時(shí)的61.33％；繼代1～5次的再生植株多態(tài)性片段比例依次為61.

4、78％、74.91％、76.13％、72.51％和78.81％，這表明隨著繼代次數(shù)的增加，再生植株的DNA多態(tài)性片段比例逐漸上升，變異逐漸加大。5.通過細(xì)胞學(xué)觀察和DNA水平分析，確定高濃度激素和繼代次數(shù)的增加是導(dǎo)致白樺體細(xì)胞無性系變異產(chǎn)生的重要原因。 6.完善了適合于白樺總DNA多態(tài)性分析的AFLP技術(shù)，篩選出適合于白樺AFLP分析的13對引物組合。 7.選出IS+5.0mg/LBA+0.5mg/LKT+2％蔗糖是使白

5、樺快速繁殖，再生植株變異較小的培養(yǎng)基，其再生植株繼代培養(yǎng)應(yīng)控制在5代以內(nèi)。 8.建立了白樺愈傷組織染色體制片技術(shù)：即取培養(yǎng)一周的愈傷組織，用0.2％的秋水仙素預(yù)處理1.5～2h，固定后用1NHCl在室溫(18～20℃)解離10～15min或室溫下用2％纖維素酶和果膠酶混合液酶解30min，壓片后易獲得分散、染色效果好的細(xì)胞分裂中期染色體圖象。 9.初步建立了白樺愈傷組織化學(xué)誘變技術(shù)：在高濃度EMS短時(shí)間處理和低濃度EMS