幾種草坪草轉(zhuǎn)基因及體細(xì)胞無性系變異的研究.pdf

1、　　本試驗(yàn)以成熟種子為試材，優(yōu)化了日本結(jié)縷草愈傷組織誘導(dǎo)及分化再生及農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因子，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了bt基因轉(zhuǎn)化日本結(jié)縷草的研究；在建立了高羊茅高效再生體系的基礎(chǔ)上，將體細(xì)胞無性系變異技術(shù)與誘變技術(shù)相結(jié)合進(jìn)行了高羊茅優(yōu)質(zhì)突變體的研究。結(jié)果如下：1)以破除休眠的日本結(jié)縷草和高羊茅成熟種子種子為外植體，通過單因素和多因素試驗(yàn)確定了兩種草坪草愈傷組織誘導(dǎo)、繼代和分化的最佳培養(yǎng)基。結(jié)果表明，高羊茅愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為含2,4-D

2、5mg/L+6-BA0.2mg/L的MS培養(yǎng)基；分化培養(yǎng)基為含6-BA3mg/L的MS培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基為不含激素的1/2MS培養(yǎng)基。2)將獲得的胚性愈傷組織進(jìn)行γ輻照處理，經(jīng)再生后獲得了一批日本結(jié)縷草和高羊茅的葉形、葉色、株高等突變體。對(duì)其中的黃葉高羊茅種子后代進(jìn)行空間技術(shù)處理。結(jié)果表明，空間技術(shù)引起的SP1生理?yè)p傷較輕，SP2未發(fā)現(xiàn)葉綠體缺失突變，但株葉形態(tài)、熟期和耐熱性變異豐富，從中篩選、鑒定了半矮稈、匍匐性、細(xì)葉、遲熟、耐熱性等

3、優(yōu)質(zhì)抗逆黃葉高羊茅突變體。3)以gus基因瞬時(shí)表達(dá)為指標(biāo)，對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)日本結(jié)縷草成熟種子誘導(dǎo)的愈傷組織轉(zhuǎn)化體系及其影響因子進(jìn)行了系統(tǒng)性研究。并研究了不同抗生素的抑菌效果和日本結(jié)縷草愈傷組織的本底耐受性。結(jié)果表明，250-500mg/L的羧芐青霉素可以較好地抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)。日本結(jié)縷草對(duì)潮霉素比卡那霉素更敏感，將愈傷組織接種于含潮霉素200mg/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，兩周后愈傷組織褐化死亡率超過90﹪?！　?)在建立了高頻再生體系和高效轉(zhuǎn)化