瑪瑙紅櫻桃離體培養(yǎng)及體細(xì)胞無(wú)性系遺傳變異.pdf

1、本文以貴州瑪瑙紅櫻桃為材料，在離體快繁及離體材料的遺傳變異檢測(cè)、甲基化分析等方面進(jìn)行了研究，旨在建立其離體快繁、微莖尖培養(yǎng)體系，獲得遺傳穩(wěn)定的瑪瑙紅櫻桃組培苗，為該品種的工廠(chǎng)化育苗，離體脫毒奠定技術(shù)和理論基礎(chǔ)。取得了以下主要成果：
　　1．瑪瑙紅櫻桃休眠芽離體培養(yǎng)技術(shù)的建立
　　選用貴州瑪瑙紅櫻桃休眠芽為外植體，將其鱗片剝除后滴加兩滴吐溫-80，用0.1％升汞進(jìn)行不同時(shí)間的滅菌處理，再用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，將已滅菌的休眠芽接種在

2、MS+1.0 mg/L GA+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LIBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂（pH=6.2）培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)休眠芽萌發(fā)，得出最佳滅菌方式為，0.1%升汞滴加2滴吐溫80滅菌10 min，其污染率為：48%，萌發(fā)率為：22%；休眠芽30-40 d后萌發(fā)，將其轉(zhuǎn)接到MS+1.0 mg/LKT+1.0 mg/L GA+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/LIBA培養(yǎng)基上進(jìn)行快繁培養(yǎng)。最佳增殖培養(yǎng)基為MS+

3、1.0 mg/LKT+1.5 mg/LGA+0.1 mg/L6-BA+0.5 mg/LIBA，增值系數(shù)達(dá)到11.5；生根培養(yǎng)基中有3種處理較為理想：MS+0.2 mg/LIBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，MS+0.3 mg/LIBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，MS+0.2 mg/LIAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂生根率均能達(dá)到75%，長(zhǎng)勢(shì)健康，葉片大，呈深綠色，主根粗壯且須根較多，GA3對(duì)瑪瑙紅櫻桃的生根沒(méi)有顯著

4、的影響。
　　2．離體材料遺傳變異及ISSR分子檢測(cè)
　　利用21條ISSR引物對(duì)瑪瑙紅櫻桃第1至第8代組培苗葉片基因組DNA進(jìn)行ISSR檢測(cè)，21條引物在繼代8代內(nèi)24個(gè)株系的DNA基因組進(jìn)行檢測(cè)，因此在引物檢測(cè)范圍內(nèi)，瑪瑙紅櫻桃在第8代內(nèi)利用ISSR檢測(cè)，沒(méi)有發(fā)生變異。
　　3．離體材料表觀(guān)遺傳變異及MSAP檢測(cè)
　　利用17對(duì)選擇性擴(kuò)增引物，對(duì)第1代至第8代組培苗基因組DNA進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，得到的條帶進(jìn)行統(tǒng)