基于ISSRs的青海云杉無性系遺傳變異及親緣關(guān)系的研究.pdf

1、青海云杉(Picea crassifolia Kom.)屬于松科(Pinaceae)云杉屬(Picea)，是我國特有的常綠針葉喬木，是西北地區(qū)重要的造林和城市綠化樹種。本論文主要對甘肅省張掖龍渠青海云杉無性系種子園的125個無性系進行了兩方面的研究:(1)青海云杉ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立和優(yōu)化，以及引物的篩選;(2)基于ISSRs的青海云杉無性系的遺傳多樣性和遺傳關(guān)系的研究。
　　采用正交試驗設(shè)計和單因素分析方法，建立了青海

2、云杉ISSR-PCR最適反應(yīng)體系。在20.0μL反應(yīng)體系中包含:模板DNA(5-10ng·μL-1)2.0μL、Mg2+(25mmol·L-1)2.8μL、10×PCR緩沖液2.8μL、引物(10μmol·L-1)0.8μL、dNTPs(10mmol·L-1)0.3μL、Taq DNA聚合酶（5U·μL-1）0.2μL、HPLC超純水11.1μL。PCR擴增程序為:94℃預(yù)變性4min;40個循環(huán):94℃變性45s;49.5-50.5℃

3、退火45s，72℃延伸2min;最后72℃延伸7min，4℃保存。利用上述已建立并優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系，從100條ISSR引物中篩選出12條譜帶清晰、多態(tài)性好、反應(yīng)穩(wěn)定的青海云杉有效引物。
　　運用篩選出的ISSR引物，對甘肅省張掖龍渠青海云杉無性系種子園的125個無性系的遺傳多樣性進行了分析。共發(fā)現(xiàn)186個ISSR多態(tài)性位點，多態(tài)性位點百分率為PPL=100.00％，平均有效等位基因數(shù)ne=1.2843;平均Nei's