毛花獼猴桃氯仿層單體化合物分離及其抗腫瘤活性機制研究.pdf

1、癌癥作為一種高致死率的疾病嚴重危害人類的健康。隨著現(xiàn)代化研究技術(shù)的發(fā)展，運用新技術(shù)新方法對中草藥的抗癌活性成分進行研究，對其抗癌機制進行探明已經(jīng)成為當今抗癌藥物研發(fā)的熱點之一，特別在對新藥及新藥先導化合物的發(fā)現(xiàn)過程中更是起著不可替代的作用。
　　 本研究選用民間長期使用具有抗腫瘤功效的畬藥毛花獼猴桃作為研究對象，在本實驗室前期研究的基礎上，對其化學成分進行系統(tǒng)分離并研究其氯仿活性部位的抗腫瘤作用機制。
　　 在化學成分分

2、離與結(jié)構(gòu)鑒定研究方面，選用毛花獼猴桃根部甲醇粗提物，采用系統(tǒng)溶劑萃取法、經(jīng)薄層層析法、化學定性顯色反應進行初步定性鑒別，使用高效液相色譜法從氯仿層有效部位中分離獲得7種單體化合物，再利用13C核磁共振波譜和1H核磁共振波譜，質(zhì)譜等方法對單體化合物進行結(jié)構(gòu)解析，結(jié)果表明化合物1為:2α，3α，24-三羥基烏蘇烷-12-烯-28-烏蘇酸（2α，3α，24-trihydroxyurs-12-en-28-oicacid），化合物2為:2β，3β

3、-二羥基-23-氧代-12-烯-28-烏蘇酸(2p，3p-dihydroxy-23-oxo-urs-12-en-28-oicacid)，化合物4為:2α,3α-二羥基-23-甲氧基.烏蘇烷-12-烯-28-烏蘇酸(2α，3α-dihydroxy-23-methoxy-12-en-28-oicacid)，化合物6為:不飽和脂肪酸。
　　 在體外抗腫瘤活性篩選實驗中，通過體外培養(yǎng)肝癌細胞株BEL-7404，運用MTT比色法、生長抑制

4、曲線等實驗，分析測試了毛花獼猴桃根部氯仿層對肝癌細胞株的增殖抑制作用，結(jié)果顯示毛花獼猴桃根部氯仿層在體外實驗中表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤活性。對肝癌細胞BEL-7404增殖的抑制作用呈劑量依賴性關系，其IC50值為114.8}Lg.mL-l。通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化，Hoechst33258以及AO/EB細胞染色實驗，初步判斷毛花獼猴桃根氯仿層可能是通過細胞壞死途徑抑制腫瘤細胞的增殖，并且這種抑制作用與濃度具有密切關系，低濃度下可選擇性地抑

5、制腫瘤細胞增殖而對正常細胞毒性作用較小。
　　 在體內(nèi)抗腫瘤活性實驗中，建立了H22肝癌小鼠模型，通過測定抑瘤率來研究毛花獼猴桃根部氯仿層在小鼠體內(nèi)的抗腫瘤作用，結(jié)果顯示給藥劑量為75mg/kg的低劑量組對H22肝癌小鼠的腫瘤有著明顯的抑制作用，抑瘤率為37.34％，而給藥劑量為150、300mg/kg的中、高劑量組效果不明顯。同時實驗結(jié)果提示:與正常小鼠組和模型小鼠組比較，毛花獼猴桃根氯仿層有一定的毒性。
　　 本論文