狗棗獼猴桃多酚的抗氧化與抗腫瘤效應(yīng)研究.pdf

1、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明自由基具有強(qiáng)氧化性,攻擊生物大分子,損害機(jī)體的組織和細(xì)胞,導(dǎo)致癌癥、炎癥、心臟病、心血管疾病、糖尿病等近百種疾病的發(fā)生,因此評價(jià)和篩選具有抗氧化功能的天然抗氧化物已經(jīng)成為現(xiàn)代生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)問題。本文以獼猴桃多酚為研究對象,采用活性跟蹤方法,獲得活性最強(qiáng)的狗棗獼猴桃多酚,并進(jìn)行組成成分分析。系統(tǒng)地分析了狗棗獼猴桃多酚的體外抗氧化活性及抗惡性腫瘤增殖活性,并對其體內(nèi)氧化損傷的防護(hù)作用以及體內(nèi)抗腫瘤作用進(jìn)行了相關(guān)性分析。<

2、br>　　系統(tǒng)地分析了獼猴桃多酚的體外抗氧化和抗惡性腫瘤增殖活性。通過總還原能力、清除生理性自由基(羥基自由基、超氧自由基)、非生理性自由基(ABTS、DPPH)、抗脂質(zhì)過氧化能力分析,發(fā)現(xiàn)狗棗獼猴桃具有最低的IC50值,其抗氧化能力最強(qiáng),其次是軟棗獼猴桃、中華獼猴桃,并發(fā)現(xiàn)其抗氧化能力與總多酚含量之間具有很好的相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)大于0.7。研究了三種獼猴桃多酚抑制HepG2、HT-29、HeLa以及A549細(xì)胞的增殖活性,結(jié)果表明三種獼

3、猴桃多酚均具有較好的抑制HepG2、HT-29、HeLa和A549等四種腫瘤細(xì)胞增殖的能力。
　　采用活性跟蹤的方法分離純化狗棗獼猴桃多酚。首先使用60％的乙醇輔助超聲波的方法對三種獼猴桃多酚進(jìn)行提取,通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮樣品,采用福林酚法測定總多酚含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)狗棗獼猴桃提取物中具有最高的總多酚含量,達(dá)到430.03±21.85mgGAE/100g鮮果。采用多通道二維色譜純化狗棗獼猴桃多酚,通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面分析優(yōu)化最佳的純化

4、條件,得最佳純化條件為:上樣量57.27mL,洗脫濃度71.71%,洗脫2.85個(gè)柱體積,在此條件下,響應(yīng)面預(yù)測結(jié)果獲得的總酚含量為11.99mg/mL,與實(shí)測結(jié)果差異不顯著。
　　純化的狗棗獼猴桃多酚復(fù)合物(AKP)通過HPLC-ESI-MS液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其中含有香豆酸、香草酸、綠原酸、山奈酚、兒茶素、白藜蘆醇、對香豆酸、異鼠李素3-O-葡萄糖苷、槲皮素3-O-己糖苷、槲皮素-鼠李糖苷等成分。
　　使用60Co

5、γ射線誘導(dǎo)小鼠建立氧化損傷模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,AKP通過促進(jìn)造血功能、增加脾細(xì)胞的增殖、并刺激白介素IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的產(chǎn)生,提高機(jī)體的免疫力,顯著的降低了輻射對機(jī)體造成的傷害。同時(shí)還激活體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng),增加了體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px),抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生,降低體內(nèi)丙二醛(MDA)的水平,提高非酶系統(tǒng)抗氧化物質(zhì)谷胱甘肽(GSH)的含量,抵抗機(jī)體在

6、氧化損傷過程中產(chǎn)生的過量自由基。結(jié)果表AKP在激活體內(nèi)抗氧化物酶系統(tǒng)的同時(shí),抑制氧化酶系的活性,降低脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生,有效的保護(hù)細(xì)胞的完整性,降低骨髓微核率和染色體畸變的產(chǎn)生,進(jìn)一步驗(yàn)證了AKP對輻射誘導(dǎo)的氧化損傷的防護(hù)作用。
　　使用S180實(shí)體瘤接種小鼠建立惡性腫瘤模型,結(jié)果表明AKP能夠顯著提高了腫瘤小鼠的存活時(shí)間,低、中、高劑量組對S180實(shí)體瘤的抑制率分別為20.91%,38.17%和44.27%,同時(shí)藥物通過促進(jìn)脾

7、淋巴細(xì)胞的增殖,顯著提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),進(jìn)一步提高機(jī)體的免疫力。機(jī)體免疫系統(tǒng)能夠有效的識(shí)別腫瘤細(xì)胞并發(fā)生應(yīng)答,從而達(dá)到抗腫瘤的目的。
　　通過DNALadder實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AKP能夠顯著的誘導(dǎo)HepG2、HeLa細(xì)胞凋亡,表現(xiàn)出特征性的梯度條帶。進(jìn)一步通過細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)AKP能夠阻滯HepG2細(xì)胞在G2/M期,而阻滯HeLa細(xì)胞在G0/G1期,使癌細(xì)胞增殖速度減慢,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這表明AKP能夠通過多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡,達(dá)