白細胞介素17A通過Stat3-iNOS誘導小鼠心肌細胞凋亡.pdf

1、背景:
　　心肌細胞凋亡是心血管疾病心室重塑的基本病理基礎，炎癥在其中可能起重要作用，但機制仍未闡明。IL-17A是一種新的炎性細胞因子，目前有關其在心血管疾病中的作用尚存在分歧。Stat3是IL-17A下游的轉錄因子，并在調控細胞凋亡方面起重要作用;iNOS作為IL-17A調控表達的下游蛋白，對細胞凋亡的作用存在爭議。我們推測，IL-17A可能通過Stat3/iNOS參與心肌細胞凋亡。
　　方法:
　　應用體外培養(yǎng)的

2、新生小鼠心肌細胞，觀察IL-17A刺激后心肌細胞凋亡指標變化:應用TUNEL染色檢測心肌細胞凋亡情況，Western blot檢測cleaved caspase3等凋亡相關蛋白的表達;應用免疫熒光染色、RT-PCR、Western blot測定Stat3、iNOS等相關因子的表達。同時，應用Stat3 shRNA腺病毒干擾技術，降低心肌細胞Stat3表達，進一步闡明Stat3在IL-17A介導的心肌細胞凋亡中的作用。
　　結果:<

3、br>　　培養(yǎng)的新生小鼠心肌細胞表達IL-17F及其受體——IL-17RA、RC，但不表達IL-17A; IL-17A對iNOS表達具有顯著時效及量效關系，100ng/ml IL-17A刺激24小時，iNOS表達水平最高(p＜0.01);100ng/ml IL-17A導致小鼠心肌細胞Stat3磷酸化，在15-30分鐘Stat3磷酸化水平最高（p＜0.01），1小時后磷酸化水平逐漸降低，總STAT3表達無明顯差異;與對照組比較，100ng

4、/ml IL-17A刺激小鼠心肌細胞24小時后，TUNEL染色陽性細胞數顯著增多(P＜0.01)，cleaved caspase3表達增加（P＜0.01），但Bcl-2/Bax比值無明顯差異;Stat3 shRNA腺病毒感染心肌細胞，與空載病毒組相比，IL-17A+空載病毒組及IL-17A+Stat3 shRNA病毒組iNOSmRNA表達均增加（P＜0.01），且后者iNOS mRNA表達量顯著高于前者(P＜0.01);同時，與空載病毒

5、組相比，IL-17A+空載病毒組IL-17F mRNA表達增加(P＜0.01);Stat3 shRNA病毒組及IL-17A+Stat3 shRNA病毒組則顯著抑制IL-17F mRNA表達（P＜0.01），兩者之間無顯著差異;與空載病毒組相比，IL-17A+空載病毒組cleavedcaspase3表達無顯著差異，Stat3 shRNA病毒組總Stat3表達明顯降低，cleavedcaspase3表達增加（P＜0.05），IL-17A+S