缺氧-復氧對大鼠VSMC myocardin基因表達的影響.pdf

1、目的：研究短期缺氧/復氧對大鼠血管平滑肌細胞myocardin基因表達的影響。 方法：無菌條件下取出大鼠胸主動脈,留取中膜,運用組織貼塊法培養(yǎng),采用第4-7代細胞進行實驗,實驗前用含1％血清的DMEM培養(yǎng)基靜止細胞24小時。自制缺氧裝置,檢測其缺氧效果,建立體外細胞缺氧方案,通過觀察細胞形態(tài)學變化、死亡細胞記數(shù)等,判斷缺氧刺激對體外培養(yǎng)平滑肌細胞活性的影響。提取細胞總RNA,用RT-PCR法,以α-Actin為內(nèi)對照,研究平滑肌

2、細胞在缺氧及復氧后不同時間段myocardin mRNA的表達變化。 結果： 1、運用組織貼塊法成功培養(yǎng)原代細胞,培養(yǎng)細胞呈典型的‘峰谷’樣生長,可滿足實驗的需要。 2、自制缺氧裝置24小時內(nèi)氧分壓明顯降低且PH值波動不明顯。對體外細胞實施缺氧氧方案后,24小時內(nèi)未見明顯細胞腫大、漂浮和壞死現(xiàn)象。 3、RT-PCR結果表明與正常對照組相比,平滑肌細胞myocardin mRNA表達在缺氧后逐漸降低(P<0