百脈根小GTPase POP6與網(wǎng)格重鏈蛋白CHC相互作用的研究.pdf

1、根瘤菌所產(chǎn)生的結瘤因子是豆科植物與根瘤菌建立共生固氮體系的信號分子，豆科植物LysM-RLK是識別根瘤菌結瘤因子的受體激酶。在模式豆科植物百脈根中結瘤因子受體激酶被命名為NFR1和NFR5，它們可能形成異源二聚體共同識別和接受結瘤因子而開啟宿主內(nèi)共生信號轉(zhuǎn)導途徑。為了深入理解豆科植物與根瘤菌共生體形成的機制，本研究在分離到與結瘤因子受體激酶NFR5相互作用的小G蛋白ROP6的基礎上，通過酵母雙雜交技術，從百脈根AD-cDNA文庫中篩選并

2、鑒定出與ROP6相互作用的陽性克隆。主要研究結果如下：
　　 1．對得到的酵母陽性克隆子，經(jīng)分離靶質(zhì)粒、PCR擴增、酶切鑒定證實含有外源片段及其大小，并通過回轉(zhuǎn)酵母進一步驗證與誘餌質(zhì)粒上ROP6間的相互作用。然后，經(jīng)DNA序列測定和NCBI數(shù)據(jù)庫BLAST分析結果表明，其目的DNA編碼網(wǎng)格重鏈蛋白CHC的兩個模體，命名為CHCR。
　　 2．在酵母體內(nèi)研究了網(wǎng)格重鏈蛋白CHCR與ROP6、CA突變體(ROP6組成型活化突

3、變體)和DN突變體（ROP6功能缺失突變體）間的相互作用。實驗結果表明，ROP6的兩種突變體都能與網(wǎng)格重鏈蛋白CHCR互相作用。
　　 3．分別在大腸桿菌中表達并純化CBD-CHCR和His-ROP6融合蛋白，利用Pull-down技術證實了CHCR和ROP6的體外相互作用。同時，雙分子熒光互補(BiFC)研究結果說明了CHCR和ROP6在煙草葉片表皮細胞中的相互作用。
　　 4．利用酵母雙雜交技術，研究了與ROP6相互