蛋白質(zhì)與離子和小分子相互作用的平衡滲析研究.pdf

1、生物大分子是近年來生命科學(xué)研究的熱點和難點之一,金屬離子與蛋白質(zhì)的作用是很多領(lǐng)域都很重視的問題,人們在這方面也做出了很多有意義的成果。另外,對變性劑使蛋白質(zhì)變性的研究則有助于揭示生命現(xiàn)象的一些未解之謎。 本文根據(jù)Viker等人和Amos等人的滲析壓裝置示意圖,成功地設(shè)計了平衡滲析裝置。首先利用此裝置研究了tris-HCl緩沖溶液中(pH=7.00)Cu(Ⅱ)與牛血清蛋白(BSA)相互作用,Scatchard圖分析表明,BSA對

2、Cu2+有兩類結(jié)合位點：1個強結(jié)合位點,其結(jié)合常數(shù)為2.3×105;8個弱結(jié)合部位,其固有結(jié)合平衡常數(shù)為5.6x103。在數(shù)據(jù)處理方法上,我們將逐級穩(wěn)定常數(shù)間存在的統(tǒng)計因子的差異考慮進去,從而得到了更為準(zhǔn)確的結(jié)果。 利用滲析平衡原理可以直接測定滲析平衡時變性劑在蛋白質(zhì)分子上的結(jié)合數(shù),這對研究蛋白質(zhì)變性的機理是十分有用的。本文運用平衡滲析法并結(jié)合量熱數(shù)據(jù)研究了30℃、不同pH值條件下溶菌酶(LYS)、牛血清蛋白(BSA)和牛血紅

3、蛋白(HBb)在兩種變性劑(尿素和鹽酸胍)體系中的變性情況及15℃、pH值為7.05時BSA與尿素的相互作用,通過實驗可以得到蛋白質(zhì)在變性不同階段與變性劑的平均結(jié)合數(shù)(v),根據(jù)蛋白質(zhì)對有機小分子或有機離子的結(jié)合能,即Wyman束縛能(П),計算出每摩爾蛋白質(zhì)結(jié)合一摩爾變性劑的自由能變化(△Gvt)的近似值,結(jié)合量熱數(shù)據(jù)計算出每摩爾蛋白質(zhì)結(jié)合一摩爾變性劑的焓變化(△Hvi)。實驗結(jié)果表明,LyS在pH=7.00時較穩(wěn)定,BSA在pH=7